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摘要Elongator是酵母中重要的转录延伸因子，是由Elp1-Elp6各两拷贝组成的组蛋白乙酰转移酶复合物，通过调控转录、胞吐和tRNA修饰等参与多种生物学过程。Elp3是其核心催化亚基。本实验室前期研究结果表明：Elp3缺失可使酵母H2O2耐受性降低，细胞内MDA、ROS等大幅升高，并使得酵母氧化应激的核心转录因子Yap1的核积累显著降低，表明Elp3功能涉及到Yap1的氧化应激通路。为深入研究Elp3在酵母氧化应激反应中与抗氧化转录因子的联系，探索其影响Yap1核定位的机制，本实验构建了Elp3与转录因子Yap1、Skn7的双缺或三缺菌株，Yap1、Skn7及Yap1入核相关蛋白Trx2、Gpx3、Ybp1的过表达质粒，通过测定H2O2胁迫下，缺失及过表达菌株耐受性及生理生化指标差异，进一步确定Elp3在氧化应激方面的作用。<br>　　ROS的大量产生可引起酵母的氧化敏感性，诱导酵母中的氧化应激反应。因此以H2O2处理细胞，对elp3△yap1△、elp3△skn7△、elp3△yap1△skn7△进行敏感性和生存率测定，发现Elp3共缺失加重了yap1△、skn7△、yap1△skn7△的氧化敏感性，降低了其生存率，酵母三缺菌株几乎不能生长；MDA和ROS可反映细胞氧化损伤程度，与敏感性实验结果一致，敲除Elp3使Yap1及Skn7单、双缺菌株的MDA、ROS水平显著升高，表明Elp3直接或间接影响Yap1、Skn7介导的氧化应激。而且在WT中过表达Yap1、Skn7、Trx2、Gpx3、Ybp1可使MDA和ROS明显降低，但在elp3△菌种中过表达5种转录相关蛋白不能改变MDA和ROS水平，进一步表明Elp3确与Yap1、Skn7介导的抗氧化转录的应答机制相关。<br>　　Yap1作为抗氧化转录因子，无应激条件下存在于细胞质中，H2O2诱导时，进入细胞核，转录抗氧化靶蛋白从而发挥作用。Yap1入核前需要氧化折叠，其蛋白修饰过程涉及Trx2-Gpx3和Ybp1蛋白的协助，因此以分别转入三种入核相关蛋白的过表达质粒的WT和elp3△菌株为材料，进行Yap1-GFP核定位检测，结果表明，WT菌株过表达Trx2、Gpx3、Ybp1均能不同程度的提高Yap1的核定位比例，而elp3△菌株中过表达Trx2、Gpx3、Ybp1蛋白，Yap1核定位比例并没有明显变化，说明Trx2、Gpx3、Ybp1过表达促进Yap1入核依赖Elp3的存在，提示Elp3可能通过影响Trx2、Gpx3、Ybp1协助Yap1氧化折叠的过程，促进Yap1的核定位，参与Yap1介导的氧化应激。<br>　　对WT和elp3△菌株的Yap1、Skn7的转录活性检测表明，elp3△菌株的Yap1、Skn7的转录活性明显高于WT，该结果似与elp3△中Yap1的核积累减少相悖，进一步实验发现，与WT不同，Yap1入核相关蛋白Trx2、Gpx3、Ybp1的过表达并不能提高elp3△菌株中Yap1的转录活性。推测可能是因为Elp3缺失阻碍了Trx2、Gpx3、Ybp1协助Yap1入核的过程，造成Yap1核积累的显著降低，启动其他代偿途径激活核内较少的Yap1的转录活性，减少ROS急剧积累对细胞的伤害，以便最大限度的补救因Elp3缺失引起的氧化敏感表型。