检索历史 清除

摘要第一部分SUMO1促进NLRP3炎性小体的分子机制研究<br>　　免疫(Immunity)是生命体的一种正常生理功能，通过这种功能用以区分“自我”和“非我”的成分，进而排斥和破坏进入机体的各种潜在的危险物质(如病菌，病毒等)，或是机体本身在代谢过程中产生的肿瘤细胞和损伤细胞等，以维持自身的正常生命周期的顺利进行。免疫主要分为先天免疫(Innate immunity)和获得性免疫(acquired immunity)两种主要类型。其中，机体中普遍存在的先天免疫体系主要是依靠模式识别受体识别外源病原体和细胞产生的应急反应。炎症小体是先天免疫体系的重要组成部分，而NLRP3炎症小体则是为人们了解得最多的炎症小体。<br>　　NLRP3炎症小体通过促进caspase-1依赖性促炎症细胞因子的诱导来调节先天性免疫和炎症反应。NLRP3炎症小体的激活机制人们的发现相对于其抑制机制要深刻得多，反映在激活NLRP3炎症小体方式的多样性上。同时，越来越多的证据表明，对NLRP3炎症小体的调控可以通过对NLRP3进行诸如泛素化等多种修饰来起调节作用。然而，异常的炎症小体活化能够引起诸多疾病，因此必须严格控制炎症小体活性。NLRP3炎性小体激活后，先进行自体寡聚相互作用，而后与凋亡相关点状蛋白(ASC)结合。ASC蛋白会招募pro-caspase-1从而形成NLRP3炎性小体复合物。复合物作为一个支架帮助下游促炎因子的分泌，即IL-1β和IL-18。本研究中，我们揭示了NLRP3炎性小体调控的部分分子机制，首次通过酵母双杂交和免疫共沉淀试验发现并证实NLRP3与SUMO偶联酶(UBC9)相互作用，随后通过Co-IP试验进一步证实了SUMO化级联反应中的小的泛素样修饰物1(SUMO1)催化Lys204残基上的NLRP3SUMO酰化。SUMO1催化的NLRP3的SUMO化促进ASC寡聚，炎症小体激活和白介素1β分泌。此外，本项研究还揭示了SURP特异性蛋白酶3(SENP3)是NLRP3脱SUMOylation所必需的。有意思的是，SENP3将SURP酰化为NLRP3，以减弱ASC募集和炎性小体点状聚集，进而抑制NLRP3炎性小体激活以及IL-1β的剪切和分泌。总之，我们揭示了SUMO1催化的SUMOylation和SENP3介导的NLRP3的去SUMO化协调了炎症小体的激活，丰富了对NLRP3炎症小体调控分子机制的认识。<br>　　第二部分SOCS3影响EV71复制的分子机制研究<br>　　人类肠道病毒71型(hEV71)属于小核糖核酸病毒科(Picornaviride)肠道病毒属(Enterovirus genus)。是引起手足口病的主要病原体,在世界范围内众所周知地能导致儿童发生严重的神经系统疾病,在罕见情况下可能导致永久性瘫痪类似脊髓灰质炎的综合症,甚至在严重的情况下患者会发生死亡。由于人们对其作用机制理解的局限性，至今未能找到能有效治疗EV71的药物和途径。自从2008年在我国大规模爆发以来，每年EV71所引起的传染病人数稳居丙型传染病之首，所造成的公共卫生安全问题引起了多方面的广泛关注。<br>　　细胞信号抑制因子3(SOCS3)是JAK-STAT信号通路的负调控因子，该基因的表达由多种细胞因子诱导，在宿主免疫反应调控和其他诸多生物学过程中发挥重要作用。由该基因编码的蛋白质可以与JAK2激酶结合，并抑制JAK2激酶的活性。<br>　　EV71-2C蛋白是EV71的非结构蛋白，参与了病毒生命循环中许多重要过程，如对宿主天然免疫系统的逃逸，病毒脱壳与病毒衣壳的形成等。<br>　　我们用EV71感染RD细胞后，能够上调SOCS3的表达，通过免疫共沉淀筛选发现EV71的非机构蛋白2C可能与SOCS3存在互作。在后续的内源性的免疫共沉淀等试验也得到了证实。过表达SOCS3后，能明显检测到EV71感染细胞的能力得到上调。说明SOCS3能帮助EV71在宿主中的复制。同时也发现SOCS3蛋白可能与EV71-2C的特定结构域存在互作。