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摘要目的：皮肤创伤后的无痕修复一直是临床治疗的难题，而研究发现胎儿皮肤存在“无痕愈合”的现象；ΔNp63是胎儿皮肤发育的主要调节剂，在表皮发生过程中起着至关重要的作用。研究表明，miRNA已参与皮肤发生的分子调控途径。本研究基于人胚皮肤小RNA测序，旨在筛选靶向ΔNp63调控人皮肤发育的miRNA，并进一步研究其调控机制，探究皮肤发育的机制，为皮肤的无痕修复奠定基础。方法：本研究采集不同胚龄胎儿皮肤样本，通过进行miRNA测序检测样本中miRNA的表达水平，利用NetworkAnalyst网站对miRNA的表达水平进行差异表达分析，筛选获得人皮肤发育过程中差异表达的miRNAs。利用GO和KEGG对差异表达的miRNAs进行功能预测，同时使用TAM2.0对差异表达的miRNA进行了富集分析，筛选出与皮肤发育过程密切相关的miRNA。将筛选得到的miRNA利用RNAbridy预测出和ΔNp63结合的情况，最终筛选出可以和ΔNp63结合的差异表达的miRNAs。根据生信分析结果，选择miRNAlet-7b-5p进行了后续的功能和机制研究。利用mimics和inhibitor转染，确定miRNAlet-7b-5p对人角质细胞系HaCaT细胞增殖凋亡的影响，利用荧光定量PCR同时对细胞凋亡相关基因和ΔNp63的相对表达水平进行了检测。为进一步确定miRNAlet-7b-5p与ΔNp63的相互关系，本研究采取双萤光素酶报告基因实验鉴定了二者的结合。同时利用慢病毒感染技术上调ΔNp63表达水平，研究其对HaCaT细胞增殖和凋亡的影响；根据差异表达miRNA进行的KEGG通路分析结果，本研究选择PI3K/AKT信号通路进行了机制研究，通过Westernblotting检测let-7b-5p对PI3K/AKT信号通路的影响。结果：1.生信分析结果：本研究发现在人皮肤发育过程中差异表达的miRNAs有363个，其中231个差异表达下调，132个差异表达上调。利用GO和KEGG对差异表达的miRNA的靶向mRNA进行功能富集分析发现靶向的mRNA主要富集于“细胞增殖正调控”、“翻译起始因子结合”、“PI3K-AKT信号通路”和“癌症通路”中。利用TAM2.0对差异表达的miRNA进行的富集分析发现，差异表达上调miRNAs主要富集在let-7家族，其主要影响细胞的分化和死亡等功能，根据let-7家族与ΔNp63结合情况最终选定了let-7b-5p进行了后续的功能和机制研究。2.let-7b-5p对人角质细胞功能的影响：CCK-8实验结果表明，上调let-7b-5p水平可抑制HaCaT细胞的增殖(P＜0.05)，下调let-7b-5p水平可促进HaCaT细胞的增殖(P＜0.05)。流式细胞术和荧光定量PCR实验检测证实，上调let-7b-5p可促进HaCaT细胞的凋亡，同时凋亡相关分子BAK、BAX、BIM表达上调，BCL-XL表达下调，(P＜0.05)；而下调let-7b-5p水平则抑制HaCaT细胞的凋亡，同时凋亡相关分子BAK、BAX、BIM表达下调，BCL-XL表达上调，(P＜0.05)。3.let-7b-5p影响HaCaT细胞增殖和凋亡机制研究：双萤光素酶报告基因实验证实，let-7b-5p通过与ΔNp63的3’-UTR区结合，影响ΔNp63的转录从而抑制ΔNp63的表达，同时荧光定量PCR实验表明，转染let-7b-5pmimic可下调ΔNp63的表达水平，转染let-7b-5pinhibitor可上调ΔNp63的表达水平。CCK-8实验结果表明，ΔNp63过表达可促进HaCaT细胞的增殖(P＜0.05)，另外流式细胞术和荧光定量PCR实验检测表明，ΔNp63过表达可抑制HaCaT细胞的凋亡，凋亡相关分子BAK、BAX、BIM表达下调，BCL-XL表达上调，(P＜0.05)。另外，Western-blot实验表明，转染let-7b-5pmimic可使PI3K/AKT通路中PI3K和AKT蛋白水平下调。结论：本研究建立了人胚皮肤miRNA表达谱，其中let-7b-5p可负向调控ΔNp63的表达抑制HaCaT细胞的增殖，促进HaCaT细胞凋亡，并引起PI3K/AKT信号通路改变，表明let-7b-5p在皮肤发育中发挥关键作用，并对皮肤发育相关疾病的诊断和治疗提供重要参考。