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摘要交联质谱技术（XL-MS）是将蛋白质化学交联与质谱相结合，用于研究蛋白质复合体结构及蛋白质间相互作用的新方法，具有通量高、灵敏度高、作用方式明确等优势。本研究通过对BSA蛋白体外交联反应体系、交联蛋白酶解方式以及交联肽段质谱数据采集方法进行系统地优化，鉴定到的交联肽段占理论交联总数的68%，符合距离限制的交联占总鉴定数的96%，交联的可信度及覆盖深度高，表明XL-MS技术体系成功建立。乙酰羟基酸合成酶（AHAS）是支链氨基酸生物合成的关键酶，由催化亚基与调控亚基组成，亚基间的相互作用对酶功能的发挥具有重要作用，且相互作用界面可作为抑制剂的潜在靶标。本研究应用XL-MS与定点突变技术研究发现催化亚基ilvI的α-βlinker及其邻近的α、β结构域，调控亚基ilvH的ACT结构域是相互作用的关键界面；ilvIα结构域的Asp111，β结构域的Lys193、Lys197以及ilvHACT结构域α1的Arg26，α2的Lys55、Lys62、Lys66是相互作用界面的关键残基，并预测获得了ilvI与ilvH相互作用全酶的结构模型。RanGTPase相关蛋白Ran、RanBP1、RCC1等通过核孔复合物调控核质转运，通过微管聚合和有丝分裂纺锤体形成调控细胞周期进程。本研究利用pulldown技术证明了Ran与RanBP1直接相互作用，Ran与RCC1直接相互作用，RanBP1和RCC1的相互作用需要Ran的参与。Ran、RanBP1、RCC1蛋白分别与293T细胞裂解液pulldown后的XL-MS实验结果发现与Ran交联的蛋白有DNA螺旋酶RAD54L2、起始识别复合体亚基ORC6；与RCC1交联的蛋白有Ras相关蛋白RALB；与RanBP1交联的蛋白有上游元件结合蛋白FUBP3、RalGTPase激活蛋白亚基RALGAPA2等。确定了Ran、RanBP1以及RCC1在DNA转录、细胞周期调控途径中的相互作用蛋白，扩充了其相互作用网络。