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摘要随着中国老龄化社会加剧，绝经后骨质疏松症（OP）发病率呈现逐年上升趋势，已经严重影响了人类健康和生活质量。临床上治疗绝经后骨质疏松大多以钙剂、雌激素、降钙素、氟制剂为主，而长期依靠雌激素治疗绝经后骨质疏松症，会加大女性患宫颈癌等疾病的风险。中医药治疗骨质疏松症历史悠久，具有疗效优良、副作用小、方法多样等特点，在改善骨质方面具有一定的临床价值。<br>　　本论文研究部分主要分为以下四个方面：<br>　　第一部分主要是红芪复方对去卵巢致骨质疏松大鼠治疗作用的筛方与拆方研究，在动物水平上筛选药效最优处方及验证其处方合理性。通过建立去势大鼠模型对以红芪为主药的3个经验方进行药效学初筛，结果表明，三个全方组对去势大鼠的骨质疏松症均具有治疗作用，其中以处方三疗效最好。进一步利用多指标正交实验验证最优复方处方三配伍的合理性，发现全方组及各拆方组对骨质疏松症均具有治疗作用，以全方组疗效最好。并且处方中每味药影响程度依次是怀牛膝＞女贞子＞熟地＞枸杞，其中怀牛膝和女贞子对综合评分有显著影响，表明女贞子和怀牛膝可能在该处方中扮演相对重要的角色。最后，通过高效液相色谱仪（HPLC-DAD）和电离喷雾质谱（ESI-MS）鉴定处方三提取物中的主要成分，鉴定出11种单体化合物。<br>　　第二部分探讨了处方三含药血清对大鼠成骨细胞(ROBs)和骨髓间充质干细胞(rBMSCs)增殖、分化的影响，在细胞水平上证明最优处方口服代谢物具有良好的抗骨质疏松效果。通过检测经不同浓度处方三含药血清处理后ROBs和rBMSCs细胞增殖率和分化矿化情况，发现处方三口服后的代谢产物（含药血清）同样具有较强的药理活性，可以显著促进ROBs和rBMSCs的增殖、骨形成和矿化能力。同样通过HPLC-DAD等手段鉴定处方三含药血清中的主要成分，发现含药血清中存在前期11种化合物中的8种。<br>　　第三部分主要是建立一种细胞膜生物特异性提取方法来筛选处方三抗骨质疏松潜在活性成分。该方法涉及将大鼠乳鼠颅骨成骨细胞与处方三提取物共培养以提取给药后细胞的细胞外液部分、细胞膜部分、细胞裂解部分，富集浓缩细胞提取液，通过HPLC-DAD筛选出处方三提取物能够与成骨细胞细胞膜特异性结合并且进入细胞内的单体化合物，这些能够与成骨细胞细胞膜特异性结合并且进入细胞内的单体化合物被推测为处方三抗骨质疏松潜在活性物质之一。结果表明，β-蜕皮甾酮、特女贞苷、芒柄花苷被推测为处方三抗骨质疏松潜在活性物质。同时，建立的细胞膜生物特异性提取方法简单，专属性和重复性好、灵敏度高，可用于筛选处方三中潜在的抗骨质疏松活性成分物质。<br>　　第四部分验证了β-蜕皮甾酮、特女贞苷、芒柄花苷这三种被推测的潜在活性成分体外抗骨质疏松活性及其抗氧化能力测试。通过MTT细胞增殖实验、ALP活力测试、矿化结节染色等手段验证了β-蜕皮甾酮、特女贞苷、芒柄花苷均具有良好的体外抗骨质疏松活性，其活性大小为：β-蜕皮甾酮＞特女贞苷＞芒柄花苷。建立过氧化氢诱导的氧化应激细胞模型，通过检测超氧化物歧化酶（T-SOD）、过氧化氢酶（CAT）等与氧化应激相关酶、活性氧水平评价了这三种化合物的抗氧化能力，其抗氧化能力大小为：特女贞苷＞β-蜕皮甾酮＞芒柄花苷。