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摘要本文主要从以下几方面进行论述：<br>　　第一部分 DEHP对大鼠肝脏脂代谢水平的影响以及炎症在其中的作用<br>　　目的：<br>　　明确DEHP对大鼠肝脏和MEHP对BRL-3A大鼠肝细胞脂代谢的影响，探讨脂代谢关键因子和炎症在DEHP暴露影响大鼠肝细胞脂代谢中的作用。<br>　　方法：<br>　　1.体内实验<br>　　选取鼠龄21天的SPF级Wistar大鼠80只，雌雄各40只，随机分为4组，即对照组、5mg/kg/d DEHP组、50mg/kg/d DEHP组和500mg/kg/d DEHP组。每组20只，雌雄各半。每日清晨灌胃染毒，连续染毒8周，每日观察大鼠状态并记录体重。<br>　　采用IBM SPSS24.0统计软件进行数据处理与分析。采用单因素方差分析比较DEHP暴露后各组间大鼠脂质、肝脏脂代谢关键基因的mRNA和蛋白水平的差异，组间两两比较采用LSD检验，检验水准设定为α=0.05。<br>　　2.体外实验<br>　　给予BRL-3A细胞不同剂量MEHP暴露24h后，采用CCK-8法检测细胞存活率；并根据CCK-8实验结果确定染毒剂量，实验分组为：空白对照组（Con）、溶剂对照组（VCon）、10μM MEHP组、50μM MEHP组、100μM MEHP组和200μM MEHP组。ELISA法测定BRL-3A大鼠肝细胞中脂质TG和TC含量，以及细胞培养液中炎症因子IL-8和IL-1β水平；Real-Time RCR法检测BRL-3A细胞中脂代谢关键基因PPARγ、Fasn、Acox1、aP2和Pdk4mRNA表达水平；western blot法检测BRL-3A细胞中PPARγ、Fasn、Acox1、Pdk4、aP2和PPARα蛋白表达水平。<br>　　结果：<br>　　1.体内实验<br>　　（1）500mg/kg/d DEHP组大鼠的体重从暴露第3周起显著高于对照组（P＜0.05）。<br>　　（2）500mg/kg/d DEHP组大鼠血清中的TC水平显著高于对照组和5mg/kg/d DEHP组（P＜0.05），500mg/kg/d DEHP组大鼠血清中的HDL水平显著高于其他组（P＜0.05）。<br>　　（3）DEHP暴露后，大鼠肝组织出现肝细胞水肿、细胞质松散和肝细胞索紊乱等异常改变，500mg/kg/d DEHP组大鼠的肝组织中肝细胞界限完全模糊，肝细胞出现了少量的脂肪变性，肝损伤明显。<br>　　2.体外实验<br>　　（1）MEHP染毒后，200μM MEHP组BRL-3A细胞内TG水平显著高于对照组和10μM MEHP组（P＜0.05），100μM MEHP组TG水平高于10μM MEHP组（P＜0.05）；200μM MEHP组TC水平与Con组相比显著升高（P＜0.05）。<br>　　（2）BRL-3A细胞内Fasn、Pdk4和aP2mRNA表达水平随染毒剂量的升高逐渐增加（P＜0.05）；100μM MEHP组PPARγmRNA表达较对照组、10μM和50μM MEHP组高，200μM MEHP组PPARγ水平最高（P＜0.05）；200μM MEHP组Acox1mRNA的表达水平在所有组中最高（P＜0.05）。<br>　　（3）100μM MEHP组BRL-3A细胞中Fasn和Pdk4蛋白水平显著高于对照组、10μM和50μM MEHP组（P＜0.05），100μM MEHP组Acox1蛋白水平与对照组、10μM和50μM MEHP组相比明显升高（P＜0.05）；200μM MEHP组Fasn、PPARγ、Acox1和aP2蛋白表达水平高于其他组（P＜0.05）。<br>　　结论：<br>　　1.高剂量DEHP暴露可以导致大鼠体重异常增加，引起肝组织病理学改变。<br>　　2.DEHP暴露可以促进大鼠肝脏和BRL-3A细胞中的脂质合成和蓄积。<br>　　3.MEHP可以引起BRL-3A细胞中PPARα蛋白表达水平下降，分泌IL-8和IL-1β水平升高。<br>　　4.炎症可以通过抑制PPARα蛋白表达促进BRL-3A细胞脂质合成和蓄积。<br>　　5.DEHP暴露能够上调PPARγ、Fasn、Pdk4、Acox1和aP2基因mRNA和蛋白的表达影响大鼠肝细胞脂质代谢。<br>　　第二部分 JAK-STAT信号通路在DEHP影响大鼠肝脏脂质代谢中的作用及其机制<br>　　目的：<br>　　明确DEHP对大鼠肝脏和MEHP对BRL-3A大鼠肝细胞内JAK-STAT信号通路表达的影响，探讨JAK-STAT信号通路在DEHP影响大鼠肝细胞脂质代谢中的作用及其机制。<br>　　方法：<br>　　1.体内实验<br>　　实验分组与DEHP染毒同第一部分。Real-Time PCR法检测大鼠肝脏中JAK2、STAT5A、STAT5B、TYK2和STAT1mRNA表达水平；western blot法检测大鼠肝脏JAK2、STAT5A、STAT5B、P-STAT5A、P-STAT5B、TYK2、STAT1、P-TYK2、和P-STAT1蛋白表达水平。采用Pearson相关分析法分析大鼠肝脏中STAT5和STAT1蛋白表达水平与脂代谢关键基因蛋白表达水平的关联。检验水准为α=0.05。<br>　　2.体外实验<br>　　BRL-3A大鼠肝细胞培养、实验分组与MEHP染毒同第一部分。Real-Time PCR法检测正常BRL-3A细胞中JAK2、STAT5A和STAT5B mRNA表达水平；western blot法检测正常BRL-3A细胞中JAK2、STAT5A、STAT5B、P-STAT5A和P-STAT5B蛋白表达水平。<br>　　采用STAT5A过表达慢病毒（Lv/sh-STAT5A）和空白载体病毒（Lv/sh-NC）分别感染BRL-3A大鼠肝细胞，构建稳定转染BRL-3A大鼠肝细胞STAT5A基因过表达细胞株。采用Real-Time PCR法和western blot法检测细胞中STAT5A的过表达效率。慢病毒转染后的实验分组为：亲本对照组（Parental）、空白载体感染组（Lv/sh-NC）、过表达STAT5A感染组（Lv/sh-STAT5A）、100μM MEHP暴露的空白载体感染组（Lv/sh-NC+MEHP）和100μM MEHP暴露的过表达STAT5A感染组（Lv/sh-STAT5A+MEHP）。ELISA法检测慢病毒感染后细胞TG和TC水平；western blot法检测慢病毒感染后细胞内Fasn、Acox1和aP2蛋白表达水平。<br>　　结果：<br>　　1.体内实验<br>　　（1）与对照组相比，DEHP暴露后大鼠肝脏JAK2mRNA表达水平降低，其中500mg/kg/d DEHP组的JAK2mRNA水平最低（P＜0.05）。50mg/kg/d和500mg/kg/d DEHP组STAT5B mRNA的表达水平显著升高（P＜0.05）。<br>　　（2）500mg/kg/d DEHP组JAK2蛋白水平与其他组相比明显降低（P＜0.05）。500mg/kg/d DEHP组P-STAT5A蛋白表达水平与其他组相比升高（P＜0.05）。5mg/kg/d和500mg/kg/d DEHP组STAT5B蛋白水平高于对照组（P＜0.05）。<br>　　2.体外实验<br>　　（1）100μM和200μM MEHP组JAK2mRNA水平低于其他三组（P＜0.05）；100μM MEHP组STAT5A mRNA表达水平显著低于对照组和10μM MEHP组（P＜0.05），200μM MEHP组STAT5A水平低于其他剂量组（P＜0.05）；MEHP染毒组STAT5B水平明显低于对照组（P＜0.05）。<br>　　（2）MEHP染毒组JAK2、P-JAK2、STAT5A、P-STAT5A、STAT5B和P-STAT5B蛋白表达水平与对照组相比明显降低（P＜0.05）；100μM MEHP组BRL-3A细胞中STAT5A、P-STAT5A、STAT5B和P-STAT5B和蛋白水平显著低于10μM MEHP组。<br>　　（3）STAT5A过表达慢病毒（Lv/sh-STAT5A）和空白载体病毒（Lv/sh-NC）成功感染BRL-3A大鼠肝细胞；Lv/sh-NC组与Parental组相比，BRL-3A细胞内STAT5A基因mRNA和蛋白表达水平均无明显变化（P＞0.05），而Lv/sh-STAT5A组STAT5A基因mRNA和蛋白水平显著升高（P＜0.05）。<br>　　结论：<br>　　1.DEHP可以影响大鼠肝脏TYK2-STAT1信号通路基因mRNA和蛋白表达。<br>　　2.DEHP/MEHP可以影响大鼠肝脏和BRL-3A大鼠肝细胞中JAK2-STAT5信号通路基因mRNA和蛋白的表达。<br>　　3.DEHP暴露后大鼠肝脏中STAT5A蛋白水平与aP2蛋白水平，P-STAT5A蛋白水平与Fasn、Acox1蛋白水平显著相关。<br>　　4.STAT5A能够抑制BRL-3A大鼠肝细胞中的脂质蓄积。<br>　　5.STAT5A可以通过调节脂代谢关键酶Fasn、Acox1和aP2的表达在MEHP所致大鼠肝细胞脂代谢紊乱中发挥作用。