• 医学文献
  • 知识库
  • 评价分析
  • 全部
  • 中外期刊
  • 学位
  • 会议
  • 专利
  • 成果
  • 标准
  • 法规
  • 临床诊疗知识库
  • 中医药知识库
  • 机构
  • 作者
热搜词:
换一批
论文 期刊
取消
高级检索

检索历史 清除

医学文献>>
  • 全部
  • 中外期刊
  • 学位
  • 会议
  • 专利
  • 成果
  • 标准
  • 法规
知识库 >>
  • 临床诊疗知识库
  • 中医药知识库
评价分析 >>
  • 机构
  • 作者
热搜词:
换一批

DEHP对大鼠肝脏脂质代谢的影响及其调控机制

摘要本文主要从以下几方面进行论述:<br>  第一部分 DEHP对大鼠肝脏脂代谢水平的影响以及炎症在其中的作用<br>  目的:<br>  明确DEHP对大鼠肝脏和MEHP对BRL-3A大鼠肝细胞脂代谢的影响,探讨脂代谢关键因子和炎症在DEHP暴露影响大鼠肝细胞脂代谢中的作用。<br>  方法:<br>  1.体内实验<br>  选取鼠龄21天的SPF级Wistar大鼠80只,雌雄各40只,随机分为4组,即对照组、5mg/kg/d DEHP组、50mg/kg/d DEHP组和500mg/kg/d DEHP组。每组20只,雌雄各半。每日清晨灌胃染毒,连续染毒8周,每日观察大鼠状态并记录体重。<br>  采用IBM SPSS24.0统计软件进行数据处理与分析。采用单因素方差分析比较DEHP暴露后各组间大鼠脂质、肝脏脂代谢关键基因的mRNA和蛋白水平的差异,组间两两比较采用LSD检验,检验水准设定为α=0.05。<br>  2.体外实验<br>  给予BRL-3A细胞不同剂量MEHP暴露24h后,采用CCK-8法检测细胞存活率;并根据CCK-8实验结果确定染毒剂量,实验分组为:空白对照组(Con)、溶剂对照组(VCon)、10μM MEHP组、50μM MEHP组、100μM MEHP组和200μM MEHP组。ELISA法测定BRL-3A大鼠肝细胞中脂质TG和TC含量,以及细胞培养液中炎症因子IL-8和IL-1β水平;Real-Time RCR法检测BRL-3A细胞中脂代谢关键基因PPARγ、Fasn、Acox1、aP2和Pdk4mRNA表达水平;western blot法检测BRL-3A细胞中PPARγ、Fasn、Acox1、Pdk4、aP2和PPARα蛋白表达水平。<br>  结果:<br>  1.体内实验<br>  (1)500mg/kg/d DEHP组大鼠的体重从暴露第3周起显著高于对照组(P<0.05)。<br>  (2)500mg/kg/d DEHP组大鼠血清中的TC水平显著高于对照组和5mg/kg/d DEHP组(P<0.05),500mg/kg/d DEHP组大鼠血清中的HDL水平显著高于其他组(P<0.05)。<br>  (3)DEHP暴露后,大鼠肝组织出现肝细胞水肿、细胞质松散和肝细胞索紊乱等异常改变,500mg/kg/d DEHP组大鼠的肝组织中肝细胞界限完全模糊,肝细胞出现了少量的脂肪变性,肝损伤明显。<br>  2.体外实验<br>  (1)MEHP染毒后,200μM MEHP组BRL-3A细胞内TG水平显著高于对照组和10μM MEHP组(P<0.05),100μM MEHP组TG水平高于10μM MEHP组(P<0.05);200μM MEHP组TC水平与Con组相比显著升高(P<0.05)。<br>  (2)BRL-3A细胞内Fasn、Pdk4和aP2mRNA表达水平随染毒剂量的升高逐渐增加(P<0.05);100μM MEHP组PPARγmRNA表达较对照组、10μM和50μM MEHP组高,200μM MEHP组PPARγ水平最高(P<0.05);200μM MEHP组Acox1mRNA的表达水平在所有组中最高(P<0.05)。<br>  (3)100μM MEHP组BRL-3A细胞中Fasn和Pdk4蛋白水平显著高于对照组、10μM和50μM MEHP组(P<0.05),100μM MEHP组Acox1蛋白水平与对照组、10μM和50μM MEHP组相比明显升高(P<0.05);200μM MEHP组Fasn、PPARγ、Acox1和aP2蛋白表达水平高于其他组(P<0.05)。<br>  结论:<br>  1.高剂量DEHP暴露可以导致大鼠体重异常增加,引起肝组织病理学改变。<br>  2.DEHP暴露可以促进大鼠肝脏和BRL-3A细胞中的脂质合成和蓄积。<br>  3.MEHP可以引起BRL-3A细胞中PPARα蛋白表达水平下降,分泌IL-8和IL-1β水平升高。<br>  4.炎症可以通过抑制PPARα蛋白表达促进BRL-3A细胞脂质合成和蓄积。<br>  5.DEHP暴露能够上调PPARγ、Fasn、Pdk4、Acox1和aP2基因mRNA和蛋白的表达影响大鼠肝细胞脂质代谢。<br>  第二部分 JAK-STAT信号通路在DEHP影响大鼠肝脏脂质代谢中的作用及其机制<br>  目的:<br>  明确DEHP对大鼠肝脏和MEHP对BRL-3A大鼠肝细胞内JAK-STAT信号通路表达的影响,探讨JAK-STAT信号通路在DEHP影响大鼠肝细胞脂质代谢中的作用及其机制。<br>  方法:<br>  1.体内实验<br>  实验分组与DEHP染毒同第一部分。Real-Time PCR法检测大鼠肝脏中JAK2、STAT5A、STAT5B、TYK2和STAT1mRNA表达水平;western blot法检测大鼠肝脏JAK2、STAT5A、STAT5B、P-STAT5A、P-STAT5B、TYK2、STAT1、P-TYK2、和P-STAT1蛋白表达水平。采用Pearson相关分析法分析大鼠肝脏中STAT5和STAT1蛋白表达水平与脂代谢关键基因蛋白表达水平的关联。检验水准为α=0.05。<br>  2.体外实验<br>  BRL-3A大鼠肝细胞培养、实验分组与MEHP染毒同第一部分。Real-Time PCR法检测正常BRL-3A细胞中JAK2、STAT5A和STAT5B mRNA表达水平;western blot法检测正常BRL-3A细胞中JAK2、STAT5A、STAT5B、P-STAT5A和P-STAT5B蛋白表达水平。<br>  采用STAT5A过表达慢病毒(Lv/sh-STAT5A)和空白载体病毒(Lv/sh-NC)分别感染BRL-3A大鼠肝细胞,构建稳定转染BRL-3A大鼠肝细胞STAT5A基因过表达细胞株。采用Real-Time PCR法和western blot法检测细胞中STAT5A的过表达效率。慢病毒转染后的实验分组为:亲本对照组(Parental)、空白载体感染组(Lv/sh-NC)、过表达STAT5A感染组(Lv/sh-STAT5A)、100μM MEHP暴露的空白载体感染组(Lv/sh-NC+MEHP)和100μM MEHP暴露的过表达STAT5A感染组(Lv/sh-STAT5A+MEHP)。ELISA法检测慢病毒感染后细胞TG和TC水平;western blot法检测慢病毒感染后细胞内Fasn、Acox1和aP2蛋白表达水平。<br>  结果:<br>  1.体内实验<br>  (1)与对照组相比,DEHP暴露后大鼠肝脏JAK2mRNA表达水平降低,其中500mg/kg/d DEHP组的JAK2mRNA水平最低(P<0.05)。50mg/kg/d和500mg/kg/d DEHP组STAT5B mRNA的表达水平显著升高(P<0.05)。<br>  (2)500mg/kg/d DEHP组JAK2蛋白水平与其他组相比明显降低(P<0.05)。500mg/kg/d DEHP组P-STAT5A蛋白表达水平与其他组相比升高(P<0.05)。5mg/kg/d和500mg/kg/d DEHP组STAT5B蛋白水平高于对照组(P<0.05)。<br>  2.体外实验<br>  (1)100μM和200μM MEHP组JAK2mRNA水平低于其他三组(P<0.05);100μM MEHP组STAT5A mRNA表达水平显著低于对照组和10μM MEHP组(P<0.05),200μM MEHP组STAT5A水平低于其他剂量组(P<0.05);MEHP染毒组STAT5B水平明显低于对照组(P<0.05)。<br>  (2)MEHP染毒组JAK2、P-JAK2、STAT5A、P-STAT5A、STAT5B和P-STAT5B蛋白表达水平与对照组相比明显降低(P<0.05);100μM MEHP组BRL-3A细胞中STAT5A、P-STAT5A、STAT5B和P-STAT5B和蛋白水平显著低于10μM MEHP组。<br>  (3)STAT5A过表达慢病毒(Lv/sh-STAT5A)和空白载体病毒(Lv/sh-NC)成功感染BRL-3A大鼠肝细胞;Lv/sh-NC组与Parental组相比,BRL-3A细胞内STAT5A基因mRNA和蛋白表达水平均无明显变化(P>0.05),而Lv/sh-STAT5A组STAT5A基因mRNA和蛋白水平显著升高(P<0.05)。<br>  结论:<br>  1.DEHP可以影响大鼠肝脏TYK2-STAT1信号通路基因mRNA和蛋白表达。<br>  2.DEHP/MEHP可以影响大鼠肝脏和BRL-3A大鼠肝细胞中JAK2-STAT5信号通路基因mRNA和蛋白的表达。<br>  3.DEHP暴露后大鼠肝脏中STAT5A蛋白水平与aP2蛋白水平,P-STAT5A蛋白水平与Fasn、Acox1蛋白水平显著相关。<br>  4.STAT5A能够抑制BRL-3A大鼠肝细胞中的脂质蓄积。<br>  5.STAT5A可以通过调节脂代谢关键酶Fasn、Acox1和aP2的表达在MEHP所致大鼠肝细胞脂代谢紊乱中发挥作用。

更多
广告
  • 浏览0
  • 下载0

加载中!

相似文献

  • 中文期刊
  • 外文期刊
  • 学位论文
  • 会议论文

加载中!

加载中!

加载中!

加载中!

特别提示:本网站仅提供医学学术资源服务,不销售任何药品和器械,有关药品和器械的销售信息,请查阅其他网站。

  • 客服热线:4000-115-888 转3 (周一至周五:8:00至17:00)

  • |
  • 客服邮箱:yiyao@wanfangdata.com.cn

  • 违法和不良信息举报电话:4000-115-888,举报邮箱:problem@wanfangdata.com.cn,举报专区

官方微信
万方医学小程序
new翻译 充值 订阅 收藏 移动端

官方微信

万方医学小程序

使用
帮助
Alternate Text
调查问卷