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摘要灵芝(Ganoderma lucidum)是担子菌纲，多孔菌目，多孔菌科，灵芝属真菌，是名贵的食药用真菌，子实体含有的主要生物活性成分为多糖和三萜类物质，具有抗肿瘤、抗衰老、抗病毒、护肝、降血脂等多种生理功能。目前，灵芝子实体主要通过代料栽培、仿野生树下栽培和段木栽培三种人工栽培方式进行生产，不同栽培模式会影响灵芝子实体中生物活性物质的含量，从而影响灵芝的生理功能。因此，本研究以采自山东的代料栽培灵芝(GL-F1)、仿野生树下栽培灵芝(GL-F2)和段木栽培灵芝(GL-F3)为研究对象，通过测定其水提物及醇提物的主要成分及体外抗氧化、抗肿瘤及免疫活性，分析了不同栽培模式来源的灵芝子实体中生物活性物质的差异，并利用代料栽培灵芝子实体的水提液进行了口服液开发。主要结果如下：<br>　　(1)通过对水提物的提取、冷冻干燥后，称重显示，灵芝子实体GL-F1水提物含量最高，达到9.55%，GL-F2、GL-F3的水提物的含量相差不大，分别为6.2%和6.12%。对水提物中灵芝多糖含量测定发现GL-F1含灵芝多糖最高，为3.10%，GL-F2和GL-F3含灵芝多糖分别为1.56%、1.62%。<br>　　通过清除羟基自由基能力的测定，对水提物的体外抗氧化能力进行了分析，结果显示GL-F1的体外抗氧化性最强，其次是GL-F3；当水提物浓度为3mg/mL，GL-F1、GL-F2和GL-F3对羟基自由基的清除率分别达到了68%、47%和60%。<br>　　通过测定水提物作用于RAW264.7细胞释放NO的含量，对水提物的免疫活性进行了分析，结果显示GL-F1水提物的免疫促进作用最强，在最大浓度400μg/mL时，其NO释放量达到16μmol/L左右，高于阳性对照LPS。<br>　　(2)利用HPLC对醇提物中三萜酸的含量进行了测定，结果显示GL-F2中三萜类物质含量最高，GL-F1含有的三萜类物质种类最丰富，含有测定的全部5种三萜酸。<br>　　通过对Caco-2结肠癌细胞抑制率测定，对三种灵芝的醇提物体外抗癌活性进行了分析，结果显示GL-F1，GL-F2灵芝子实体醇提物的细胞抑制效果相差不大，都高于GL-F3的细胞抑制作用，在最大浓度200μg/mL时，三种灵芝的醇提物对Caco-2细胞抑制率分别达到67.5%、65.3%、62.5%。<br>　　(3)以灵芝多糖为指标，通过单因素实验、响应面试验优化了GL-F1活性物质的水提工艺，得到最佳提取工艺为：液料比70mL/g、提取时间3.0h，提取温度90℃，超声时间20min，按照最佳工艺得到灵芝多糖的提取率为4.38%。<br>　　(4)以GL-F1水提液为原料，制作了灵芝口服液，通过单因素和正交试验得到了灵芝口服液最佳工艺：水提液添加量60%，零卡糖添加量6.0%，柠檬酸添加量0.15%，蜂蜜添加量2.5%。在此参数下感官评分为90分，由此方案制得的灵芝口服液澄清透明，灵芝香味宜人，口感柔和，甜苦适宜，味道极佳。综合考虑杀菌效果及对口服液产品的品质影响，选用杀菌温度100℃，杀菌时间10min的方式进行杀菌。此条件下口服液的菌落总数为32CFU/mL，大肠杆菌数未检出，致病菌未检出，符合国家标准规定的微生物指标要求。质量指标检测显示，口服液中灵芝多糖含量为252mg/100mL，蛋白质含量为31mg/100mL，可溶性固形物含量为10.15g/100mL，pH为4.42。