摘要目的:<br> 阐明海马给予miR-181c能否参与TRIM2-NF-L-NR1通路,从而缓解CCI术后造成的大鼠神经痛、疼痛导致的认知功能减退及痛相关的焦虑和抑郁行为。<br> 方法:<br> 1.SD大鼠32只,分为假手术组(Sham)、CCI模型组(CCI)、miR-181c激动剂(miR-181cagomir)干预组和miR-18c抑制剂(miR-181cantagomir)干预组。在术前和术后测定机械缩足反应阈值(Mechanicalwithdrawalthreshold,MWT);<br> 2.情绪及认知功能的行为学检测:糖水实验和高架十字迷宫实验用于检测大鼠痛相关情绪;Y迷宫实验用于检测大鼠探索行为、识别空间能力;<br> 3.尼氏染色和高尔基染色用于检测各组大鼠海马CA1区神经元形态变化;<br> 4.免疫组化检测各组海马CA1区NF-L表达;<br> 5.WesternBlot检测各组海马TRIM2、NF-L和NR1表达;<br> 结果:<br> 1.在MWT检测中,与对照组相比,CCI组MWT明显降低(Plt;0.05);与CCI组相比,miR-181c激动剂干预组MWL明显升高(Plt;0.05),提示发挥镇痛效应,而miR-18c抑制剂干预组MWL进一步降低(Plt;0.05),提示出现了更剧烈的痛觉过敏。2.在Y迷宫实验中,与对照组相比,CCI大鼠探索三个臂端的总距离下降(Plt;0.05);与CCI组相比,给予,miR-181c激动剂后,大鼠探索三个臂端的总距离增加(Plt;0.05),而给予miR-18c抑制剂后,大鼠探索三个臂端的总距离进一步下降(Plt;0.05)。<br> 3.在糖水消耗实验中,CCI大鼠在术后糖水偏好明显下降(Plt;0.05);与CCI大鼠相比,miR-181c,miR-181c激动剂处理后,第7d和第10天糖水偏好显著增加(Plt;0.05);而在miR-18c抑制剂干预组,糖水偏好显著下降(Plt;0.05)。<br> 4.高架十字迷宫实验结果显示,与Sham组比较,CCI后10d和14d开臂停留时间比例和开放臂数量减少(Plt;0.05)。与CCI组比较,miR-181c激动剂干预组的开停留时间和开臂次数比例均增加(Plt;0.05);而miR-18c抑制剂干预组的开臂停留时间和开臂次数比例进一步降低。<br> 5.在尼氏染色中,与对照组相比,CCI组CA1区存活神经元数量减少(Plt;0.05);与CCI组相比,miR-181c激动剂干预组CA1区存活神经元数量增多(Plt;0.05);但与CCI组相比,miR-181c抑制剂干预组CA1区存活神经元数量无明显差异。<br> 6.在免疫组化实验中,与对照组相比,CCI组CA1区NF-L表达减少;与CCI组相比,miR-181c激动剂干预组CA1区NF-L表达增多;与miR-181c激动剂干预组相比,miR-181c抑制剂干预组NF-L表达有所减少。<br> 7.在WB实验中,与对照组相比,CCI组海马TRIM2的表达升高(Plt;0.05),而NF-L与NR1的表达下降(Plt;0.05);与CCI组相比,miR-181c激动剂干预组TRIM2表达下降(Plt;0.05)而NF-L与NMDAR1(NR1)表达上升(Plt;0.05);与miR-181c激动剂干预组相比,miR-18c抑制剂干预组TRIM2表达上升(Plt;0.05),NF-L与NR1表达下降(Plt;0.05)。<br> 8.在高尔基染色实验中,与对照组相比,CCI大鼠海马神经元数量减少,CA1区神经元顶树突的总长度、树突棘密度以及树突分支复杂程度均明显下降(Plt;0.05)。与CCI组相比,给予miR-181c激动剂后,CA1区神经元顶树突的总长度、树突棘密度以及树突分支复杂程度均有所增加(Plt;0.05);与miR-181c激动剂干预组相比,给予miR-181c抑制剂后,CA1区神经元顶树突的总长度、树突棘密度以及树突分支复杂程度均明显下降(Plt;0.05)。<br> 结论:<br> 海马CA1区给予miR-181c可以通过调节TRIM2-NF-L-NR1信号通路,减轻CCI大鼠机械痛敏,缓解抑郁样行为,改善认知能力。
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