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摘要目的：探讨淫羊藿苷（ICA）对阿尔茨海默病（AD）小鼠β-淀粉样前体蛋白（APP）泛素化修饰的影响。<br>　　方法：细胞实验，采用过表达人APP695的HEK293细胞（OE-APP）以及正常的HEK293细胞（空白）进行研究，分为6个小实验：①分组：空白组、ICA（10、20、40、60、80、100μM）组；处理：根据分组处理结束后，MTT法检测细胞活力。②分组：空白组+蛋白合成抑制剂CHX50μg/mL（0、0.5、1、2、3、4h）、ICA（60μM）+CHX；处理：采用CHX处理不同时间点后，Westernblot检测APP的蛋白水平。③分组：空白组、ICA（60μM）组、蛋白酶体抑制剂MG132（20μM）组、ICA（60μM）+MG132（20μM）组；处理：采用APP抗体进行免疫共沉淀（Co-IP），Westernblot检测泛素（Ub）、UbK48、UbK63、APP、HRD1蛋白水平。④分组：空白组、空白+ICA（60μM）组、OE-APP组、OE-APP+ICA（60μM）组；处理：Westernblot检测ICA对HRD1蛋白表达的影响。⑤分组：Control-siRNA组、HRD1-siRNA（60、70、80nM）组、Control-siRNA组、Control-siRNA+ICA（60μM）组、HRD1-siRNA（80nM）、HRD1-siRNA（80nM）+ICA（60μM）组；处理：Westernblot检测HRD1的沉默效率，以及转染HRD1-siRNA后，Westernblot检测Ub、UbK48、UbK63、APP、HRD1蛋白水平。⑥分组：空白组、空白+ICA（60μM）组；处理：免疫荧光检测APP与早期、晚期内体标志物（EEA1、LAMP2）的共定位。<br>　　动物实验中，雄性APP/PS1转基因小鼠和野生型（WT）小鼠随机分成5个组：WT对照组（n=10）、WT+ICA60mg/kg给药组（n=10）、APP/PS1对照组（n=10）、APP/PS1+ICA60mg/kg给药组（n=10）、APP/PS1+多奈哌齐（DPZ）1mg/kg给药组（n=8），给药组自6月龄起灌胃ICA或DPZ，对照组小鼠给予等量蒸馏水，每天1次，连续灌胃给药3个月后，Morris水迷宫和Y迷宫实验检测小鼠空间学习记忆功能的改变；之后收集脑组织，提取总蛋白质，APP抗体进行免疫共沉淀（Co-IP），Westernblot检测Ub、UbK48、UbK63、APP、HRD1蛋白水平；免疫荧光检测APP与早期、晚期内体标志物（EEA1、LAMP2）的共定位。<br>　　结果：细胞实验研究表明：ICA浓度不超过80μM不影响细胞活力；ICA可以促进APP蛋白的降解，这一结果与ICA增加APP的泛素化水平有关，特别是总泛素化和UbK48连接的APP泛素化水平；另外，ICA可促进HRD1蛋白的表达；80nMHRD1-siRNA可使HRD1蛋白水平降低至73%，沉默HRD1以后，APP的UbK48、UbK63和总泛素化修饰水平均明显降低；此外，ICA可降低EEA1和APP的共定位，而ICA对LAMP2和APP的共定位几乎没有影响。动物实验结果表明：ICA可明显改善小鼠空间学习和记忆功能，以及ICA可刺激AD模式小鼠脑内UbK48连接的APP泛素化，而对UbK63连接的APP泛素化作用较小；另外，ICA可降低AD模型小鼠脑内EEA1和APP的共定位，而ICA对LAMP2和APP的共定位几乎没有影响。这一结果与细胞实验结果一致。<br>　　结论：ICA通过上调HRD1蛋白表达增加APP泛素化修饰，促进蛋白酶体依赖的APP蛋白降解，从而改善AD小鼠的空间学习记忆功能。