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摘要目的:结直肠癌(CRC)是一种常见的恶性肿瘤，是威胁人类健康的重要原因之一。SLC26A9(Solutecarrierfamily26member9)是多功能阴离子转运体SLC26A家族中的一员，具有Cl-通道的功能。我们之前的研究表明，SLC26A9缺失导致小鼠胃癌的发生，这首次证明了它在肿瘤发生中的作用[27]。然而，SLC26A9在CRC发生发展中的作用机制尚不清楚。<br>　　方法:1）用IHC检测人正常结直肠黏膜、癌前疾病（结直肠息肉、腺瘤）和结直肠癌组织中SLC26A9的表达量以及临床病理学特征的相关性分析。<br>　　2）运用WB技术检测人正常结直肠组织、结直肠癌组织中SLC26A9的表达量。qPCR与WB方法比较SLC26A9在不同结直肠癌细胞系中的表达。<br>　　3）在COLO201细胞株中构建沉默SLC26A9稳定株；在SW48细胞株中构建过表达SLC26A9稳定株；通过qPCR和WB分别验证沉默/过表达SLC26A9基因是否成功。<br>　　4）在COLO201沉默稳定株中，通过CCK-8增殖实验和细胞周期实验，检测沉默SLC26A9基因后（即沉默组），比较空转组与沉默组细胞的增殖能力。<br>　　5）在COLO201沉默稳定株中，运用流式细胞凋亡实验，检测沉默SLC26A9基因后（即沉默组）,比较空转组与沉默组细胞凋亡情况。<br>　　6）在SW48过表达稳定株中，通过CCK-8增殖实验、生长曲线实验、Ki67、克隆形成实验和流式细胞周期实验，检测过表达SLC26A9基因后（即过表达组），比较空转组与过表达组的细胞增殖能力。<br>　　7）在SW48过表达稳定株中，通过划痕实验，检测过表达SLC26A9基因后（即过表达组），比较空转组与过表达组细胞的迁移能力。<br>　　8）在SW48过表达稳定株中，运用流式细胞凋亡实验，检测过表达SLC26A9基因后（即过表达组）,比较空转组与过表达组细胞凋亡情况。<br>　　9）运用裸鼠皮下成瘤实验检测人COLO201细胞沉默SLC26A9后，空转组与过表达组的成瘤情况。<br>　　10）运用肺转移瘤实验检测通沉默SLC26A9或过表达SLC26A9后，观察结直肠癌肺转移能力。<br>　　11）在SW48过表达稳定株、COLO201沉默稳定株中，通过WB研究SLC26A9对肿瘤细胞增殖、EMT、凋亡和CSCs的影响。以及探索SLC26A9对WNT/β-catenin信号通路的影响。<br>　　12）通过细胞浆与细胞核蛋白提取，利用WB验证SLC26A9从细胞浆向细胞核移位并累积机制的研究。<br>　　13）利用选择性的β-catenin抑制剂XAV-939，进一步阐明SLC26A9影响WNT/β-catenin信号通路的机制。<br>　　结果:SLC26A9在正常结直肠上皮（n=135）、增生性息肉（n=76）和腺瘤（n=106）的细胞质中表达较低，在结直肠腺癌中表达明显升高，且移位到细胞核（n=150，plt;0.0001）。此外，SLC26A9表达上调与患者不良预后相关。与正常结肠细胞系(NCM460)相比，SLC26A9在所有CRC细胞系中表达均显著上调，在COLO201细胞系中表达最高，在SW48细胞系中表达最低。在COLO201中沉默SLC26A9，可诱导细胞周期阻滞和凋亡，并在体内外抑制细胞增殖和皮下移植瘤的生长。分子机制的研究表明,SLC26A9与β-catenin在CRC的细胞核均有表达,并从胞浆向细胞核移位，激活WNT信号通路，促进下游靶基因的转录，包括CCND1,c-Myc和Snail，但抑制细胞色素C(Cyt-C),Caspase9,Caspase3,凋亡诱导因子(AIF)和核酸内切酶G(EndoG)，表明抑制Caspase依赖和非依赖的凋亡通路。SLC26A9表达的改变导致上皮间充质转化（Epithelialmesenchymaltransition,EMT）标记物的改变，包括E-cadherin表达下调，N-cadherin表达增加，以及EMT诱导的癌症干细胞(CSC)改变，包括CD44、CD133、Lgr5、OCT4和Nanog表达上调。<br>　　结论:SLC26A9上调并移位到细胞核激活了WNT/β-catenin信号通路，导致了CRC的发生发展。SLC26A9可能是CRC新的候选癌基因。