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摘要目的：本实验通过对面部皮肤组织病理学特征及真皮成纤维细胞相关生物学特性的差异性研究，拟探讨年龄因素对女性面部皮肤老化的影响，为延缓衰老提供一定的实验基础，同时也给新治疗方法的疗效评估提供一种评价标准。<br>　　方法：1.选取2019年01月至2020年12月遂宁市中心医院医疗美容科及口腔颌面外科行面中部手术中切除的新鲜的废弃的颌面部皮肤组织标本共45例，将收集到的皮肤组织分为组织学实验组和细胞学实验组（两组的皮肤组织均来自同一个体的同一部位）,按患者的年龄分为低龄组（18-29岁）、中龄组（30-49岁）和高龄组（≥50岁）三个年龄段组。同时，留取患者术前面部影像资料结合GIogau光老化分级标准初步分析其面部老化情况。2.以组织学实验组皮肤组织（n=45例，每组15例）作为研究对象，通过苏木精-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色、Masson胶原染色观察并分析（ImageJ软件）各年龄组皮肤表皮厚度、钉突长度、真皮层胶原纤维面积。3.以细胞学实验组皮肤组织（n=9例，每组3例）作为研究对象，经酶消化法获取不同年龄组女性面部成纤维细胞系。（1）收集各组成纤维细胞，制作细胞爬片后进行HE染色，光学显微镜下观察各组细胞形态并采集图片；（2）通过免疫荧光检测特异性蛋白Vimentin的表达情况；（3）采用CCK-8法检测成纤维细胞增殖情况并绘制生长增殖曲线；（4）通过流式细胞检测技术检测各组成纤维细胞周期情况；（5）通过β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色，检测成纤维细胞的衰老情况；（6）制作细胞膜片：取第3代成纤维细胞经成膜培养基连续培养14天后进行HE染色，光学显微镜下观察各组膜片情况并采集图片；（7）采用RT-qPCR法检测各组细胞COL-1、COL-3、MMP-1、MMP-3基因的表达情况。4.计量资料采用均数±标准差表示,多组间比较采用多样本均数的单因素方差分析，两组间比较采用双样本t-检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。<br>　　结果：1.面部影像学资料：随着年龄的增加，女性面部皮肤变得粗糙、出现皱纹和色素斑，毛孔粗大，肤色暗沉。面部皱纹主要出现在眼外眦及下眼睑处。低龄组、中龄组、高龄组依次符合Ⅰ级光老化、Ⅱ级光老化和Ⅲ级光老化。2.组织学实验结果：（1）与低龄组比较，中龄组、高龄组面部皮肤表皮厚度下降，差异具有统计学意义（P＜0.01）；同时，面部皮肤上皮钉突长度在低龄组、中龄组和高龄组中依次下降，差异均具有统计学意义（P＜0.01）。其中，低龄组上皮钉突最明显，表皮-真皮分界清楚、连接紧密，真皮层成纤维细胞多，胶原纤维丰富、排列紧密。中、高龄组上皮钉突基本消失，表皮-真皮分界不清、连接不佳，真皮层成纤维细胞数减少，胶原纤维稀疏、断裂。（2）与中龄组、老龄组相比，低龄组真皮层胶原纤维面积最大，差异具有统计学意义（P＜0.01）；与老龄组相比，中龄组胶原纤维面积差异明显，差异具有统计学意义（P＜0.01）。3.细胞学实验结果：（1）从面部皮肤组织中提取的细胞呈长梭形，免疫荧光结果显示分离的成纤维细胞表达波形蛋白阳性。（2）从低龄组到中龄组和高龄组，成纤维细胞形态逐渐由清晰规则的长梭形变为不规则的扁平型状、条索状。（3）CCK-8的实验结果提示：细胞在接种后第1～3天，细胞生长较迅速，细胞数明显增加；5～6天细胞生长变慢，细胞数逐渐进入平台期，符合一般细胞的生长规律。与中龄组、老龄组相比，低龄组细胞增殖较快。（4）细胞周期实验结果提示：各组面部成纤维细胞周期主要在G0/G1期（约80%+），这说明实验所用细胞具有生长增殖能力。（5）SA-β-Gal染色计数结果显示：与中龄组、高龄组相比，低龄组衰老细胞数少，差异具有统计学意义（P＜0.01）；与高龄组相比，中龄组衰老细胞数较少，差异具有统计学意义（P＜0.01）。（6）细胞膜片结果显示：随着时间的增加，各组成纤维细胞数的增加，细胞膜片逐渐形成；细胞排列由疏松有序变得杂乱紧密，细胞间无空隙。约在第10天，低龄组可见细胞膜形成。细胞膜片HE染色结果显示：细胞膜片由多层成纤维细胞组成，周围包裹丰富的细胞外基质。（7）RT-qPCR结果显示：各组细胞COL-1、COL-3、MMP-1、MMP-3mRNA相对表达量有差异。与中龄组、高龄组相比，低龄组高表达COL-1、COL-3，低表达MMP-1、MMP-3，差异具有统计学意义（P＜0.05）。与低龄组、中龄组相比，中龄组高表达MMP-1、MMP-3，差异具有统计学意义（P＜0.01）。<br>　　结论：不同年龄段女性面部老化程度不一样，其在表皮老化、真皮老化及真皮成纤维细胞衰老相关分泌表型三个方面均有不同程度的差异。其中，真-表皮交界和真皮层胶原纤维蛋白密度的改变与年龄最为相关，可作为今后面部老化研究的相关评判指标。