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摘要目的：探索沉默P75神经营养蛋白受体（p75neurotrophinreceptor，P75NTR）联合神经生长因子（nervegrowthfactor，NGF）过表达对大鼠骨髓间充质干细胞（bonemesenchymalstemcells，BMSCs）增殖活性和复合脱钙骨基质（demineralizedbonematrix，DBM）构建组织工程骨异位成骨能力的影响，对NGF、P75NTR新型复合基因在组织工程研究具有重要意义，并且为治疗骨缺损提供理论依据和新思路。<br>　　方法：通过贴壁分离法培养SD大鼠BMSCs并传代，流式细胞仪检测干细胞表面标志物。取第3代BMSCs分别用慢病毒介导沉默P75NTR基因（B组）、NGF过表达基因（C组）、沉默P75NTR和NGF过表达双基因（D组）分别传染BMSCs，以未转染细胞作为对照（A组）。转染7d后荧光显微镜观察目的基因荧光蛋白表达。细胞计数试剂盒8法检测转染后连续8d细胞的活性。Westenblot检测各组P75NTR和NGF蛋白表达。倒置相差显微镜和扫描电镜分别观察沉默P75NTR和NGF过表达双基因转染后BMSCs与DBM的黏附情况。分别将上述4组转染后BMSCs与DBM共培养制备组织工程骨，埋植于8周龄SD大鼠背侧皮下组织构建皮下异位成骨模型（n=6），术后4、8周行HE染色，术后8周ALP染色观察钙结节形成情况，实时荧光定量PCR检测成骨相关基因Runt相关转录因子2（Runt-relatedtranscriptionfactor2，Runx2）、ALP和骨钙素（osteocalcin，OCN）表达。结果：第3代BMSCs呈长梭形或纺锤形，经细胞形态学观察及CD14、CD29、CD34、CD44、CD45流式细胞仪鉴定，所培养细胞为BMSCs。转染7dA组未见荧光表达，B组呈红色荧光表达，C组呈绿色荧光表达，D组呈红绿色复合荧光表达；目的基因荧光表达率可达70%左右。Westernblot检测示，A、C组P75NTR蛋白相对表达量显著高于B、D组，C、D组NGF蛋白相对表达量显著高于A、B组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。随时间推移，各组细胞增殖活性均上升，其中D组上升最明显，3~8d细胞活性明显高于A组（P＜0.05）。倒置相差显微镜和扫描电镜观察示，BMSCs能与DBM形成良好黏附。皮下异位成骨实验显示，术后4周和8周，D组对比其他三组，有更多的骨组织形成；ALP染色示D组ALP活性最高，有更好的成骨表达。实时荧光定量PCR检测示，与A组比较，D组Runx2、ALP、OCNmRNA相对表达量显著升高，差异均有统计学意义（P＜0.05）。<br>　　结论：沉默P75NTR联合NGF过表达双基因共转染BMSCs复合DBM构建组织工程骨具有良好的异位成骨能力，通过提高NGF的水平、关闭P75NTR凋亡通道，不仅可以提高细胞活性，还能更好促进骨组织再生。