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摘要研究背景：课题组前期应用基因捕获测序技术在一个甘肃地区的全面性癫痫家系发现了DGKG基因外显子编码区域内同一位点的杂合错义突变，导致该位点碱基由G置换为A，造成基因编码氨基酸序列由精氨酸（Arg，R）转变为谷氨酰胺（Gln，Q)，可能导致蛋白质功能受到影响。通过遗传数据库查询及文献调研，发现该基因突变尚未在国内外癫痫病例中报道。DGKG基因编码蛋白蛋白二酰甘油激酶-γ（diacylglycerolkinasegamma，DGKγ）属于二酰甘油激酶（diacylglycerolkinase，DGKs）蛋白家族，而DGKs在神经系统中与神经元形态发育、突触可塑性、囊泡转运以及细胞极性转化等过程密切相关。此外，DGKγ的多个同源蛋白（DGKε、β、δ、ζ）均与癫痫易感性相关。因此，源自该癫痫家系的DGKG错义突变可能与癫痫的发生发展过程有关。<br>　　研究目的：研究DGKG基因突变引起的神经元细胞功能改变（如神经元发育、电生理特性及信号转导通路），在体外细胞水平初步探索DGKG基因该错义突变是否与癫痫相关及其可能的致病机制。<br>　　研究方法：本实验主要采用原代神经元培养、细胞转染、全细胞膜片钳、免疫印迹、免疫荧光、串联质谱等常见神经生物学实验技术。通过构建野生型DGKG与突变型DGKG质粒，转染原代海马神经元进行培养，利用蛋白免疫印迹技术检测转染野生型和突变型质粒的海马神经元蛋白表达有无差异；通过全细胞膜片钳技术记录野生型和突变型海马神经元电生理特性有无改变；通过免疫荧光技术观察基因突变对神经突触数目、神经元形态发育的影响；采用串联质谱技术以及生物信息学描述转染突变型质粒在海马神经元表达的蛋白的功能和可能参与的信号转导通路。<br>　　研究结果：<br>　　1.转染野生型和突变型DGKG质粒原代海马神经元的细胞总蛋白表达无差异。<br>　　2.转染突变型DGKG质粒的原代海马神经元与转染野生型DGKG质粒的神经元中，静息膜电位、诱发动作电位的阈值以及动作电位的频率无显著差异。3.转染突变型DGKG质粒的原代海马神经元与转染野生型DGKG质粒的神经元相比，微小抑制性突触后电流（miniatureinhibitorypost-synapticcurrents，mIPSCs）的频率增加（P＜0.05），幅值显著无差异；微小兴奋性突触后电流（miniatureexcitatorypost-synapticcurrents，mEPSCs）的幅值和频率均没有差异。<br>　　4.与转染野生型DGKG质粒的原代海马神经元相比，转染突变型DGKG质粒的原代海马神经元的突起的数量、长度以及树突棘的密度均无显著差异。<br>　　5.串联质谱鉴定突变型DGKG的相互作用蛋白，通过对蛋白组群进行GO功能富集分析和KEGG信号通路富集分析，提示突变型DGKG可能参与局部连接、突触小泡循环、ECM-受体相互作用、mTOR等信号转导通路。<br>　　研究结论：来自一个甘肃地区全面性癫痫家系的DGKG基因的杂合错义突变会增加原代海马神经元的微小抑制性突触后电流（mIPSCs）的频率，该基因突变可能通过参与突触小泡循环从而影响神经元的抑制性突触传递，从而进一步影响癫痫的发生发展。