摘要目的:研究通过三(2-羧乙基)膦盐酸盐(TCEP)还原溶菌酶形成淀粉样蛋白纳米球并表面修饰Ⅰ型胶原促进胶原纤维内矿化:<br> 1.探究淀粉样蛋白纳米球构相的调控因素及其对胶原纤维的表面修饰作用。<br> 2.研究淀粉样蛋白纳米球与矿物离子的相互作用。<br> 3.探究淀粉样蛋白纳米球表面修饰Ⅰ型胶原促进胶原纤维内矿化的条件和机制,为胶原纤维内矿化相关实验研究和临床应用提供参考。<br> 方法:制备淀粉样蛋白纳米球:TCEP还原天然溶菌酶,圆二色光谱(CD),刚果红染色,扫描电子显微镜(SEM)和透射电子显微镜(TEM)表征淀粉样蛋白纳米球的形成。<br> 探究淀粉样蛋白纳米球粒径大小的调控因素将溶菌酶溶液和TCEP溶液分别混合不同时间,动态光散射(DLS)测量淀粉样蛋白纳米球粒径<br> 探究淀粉样蛋白纳米球对胶原纤维的表面修饰作用及机制傅里叶变换红外光谱(FTIR)测定淀粉样蛋白纳米球修饰前后胶原波长的变化,动态热机械分析仪(DMA)测定有无淀粉样蛋白纳米球表面修饰的胶原纤维的最大断裂强度,从而评价分析淀粉样蛋白纳米球对胶原纤维的表面修饰作用和机制<br> 探究淀粉样蛋白纳米球与矿物离子的作用及对胶原纤维内矿化的促进作用等温滴定量热法(ITC)测定淀粉样蛋白纳米球与CaCl2溶液结合过程中释放或吸收的热量,然后计算出结合亲和力(KD)、化学计量(n)、焓(ΔH)和熵(ΔS);有无淀粉样蛋白纳米球表面修饰的胶原纤维均置于m-SBF溶液中孵育相同时间,通过SEM和TEM观察胶原纤维矿化程度,热重分析(TGA)表征矿化胶原纤维矿物质含量,DMA检测矿化胶原纤维的最大断裂强度<br> 结果:CD,刚果红染色,SEM和TEM结果均显示淀粉样蛋白纳米球的形成,DLS结果显示淀粉样蛋白纳米球粒径大小随着反应时间延长而逐渐增大,溶菌酶与TCEP混合2min可形成直径100-200nm的纳米球,由直径20-50nm的纳米球聚集形成。FTIR,SEM和TEM结果显示淀粉样蛋白纳米球可结合并表面修饰胶原纤维,DMA显示淀粉样蛋白纳米球表面修饰的胶原纤维具有更大的断裂强度,从一定程度上反应淀粉样蛋白纳米球对胶原纤维的交联作用。ITC结果显示淀粉样蛋白纳米球与CaCl2溶液的反应是自发的放热反应,即淀粉样蛋白纳米球可自发吸引富集Ca2+。矿化实验结果显示有淀粉样蛋白纳米球表面修饰的胶原纤维矿化3h即可实现纤维内矿化,而无淀粉样蛋白纳米球表面修饰的胶原纤维则需12h,且矿化程度和机械性能相较于无淀粉样蛋白纳米球表面修饰组较差。<br> 结论:淀粉样蛋白纳米球表面修饰Ⅰ型胶原可促进胶原纤维内矿化。
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