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摘要巨噬细胞是人体内固有的先天免疫细胞，不仅参与机体的炎症反应和修复损伤，还影响各种免疫疾病的发展。近年来，研究发现巨噬细胞是一种具有可塑性的免疫细胞，其形态和功能的变化已引起越来越多的学者的关注。在复杂多变的微环境中，巨噬细胞可以分为炎症型（M1型）巨噬细胞和组织修复型（M2型）巨噬细胞。目前发展研究分析认为，M1型巨噬细胞可以通过分泌多种炎症因子如：白介素-6（IL-6），肿瘤坏死因子-α（TNF-α），高表达诱导型一氧化氮合酶（iNOS），诱发辅助性T细胞（Th1）型免疫应答促进炎症反应；M2型巨噬细胞可以增加白介素10（IL-10）、人精氨酸酶1（Arg-1）、FIZZ1的表达，诱发Th2型免疫应答而抑制炎症反应，促进组织修复。近年来，M型瞬时受体电位通道7（transient receptor potential melastatin7,TRPM7）被学者发现可以通过免疫细胞在免疫疾病中发挥作用。作为新型免疫调控分子，TRPM7不仅参与调控巨噬细胞的增殖和功能，还可以影响巨噬细胞的炎症因子分泌。但是TRPM7对巨噬细胞极化的作用机制尚不明确，因此本研究选取小鼠腹腔巨噬细胞系RAW264.7进行进一步的研究。<br>　　实验目的：<br>　　本课题旨在研讨TRPM7与巨噬细胞极化的关系，并通过建立体外培养试验方法检测TRPM7对巨噬细胞分泌因子的影响，初步分析探讨TRPM7调控巨噬细胞极化的作用形成机制。本研究划分为三个部分。<br>　　实验方法：<br>　　（1）体外用LPS（1000ng/ml）和IFN-γ（20ng/ml）诱导24h建立M1型巨噬细胞模型；用IL-4（20ng/ml）诱导24h建立M2型巨噬细胞模型。用q-PCR实验方法检测M1/M2巨噬细胞模型中TRPM7的表达变化。<br>　　（2）给予2-APB（100μM）和TRPM7-siRNA阻断RAW264.7细胞中的TRPM7。用Western blot检测RAW264.7细胞中的TNF-α，iNOS，Arg-1,CD206蛋白变化，同时用q-PCR实验方法检测细胞中M1/M2生物标记物（IL-6,TNF-α,iNOS,CD86,IL-10,TGF-β,Arg-1,CD206）的变化，此外，并用ELISA检测细胞上清液中IL-6，TNF-α，IL-10和TGF-β变化。<br>　　（3）在阻断TRPM7后，提取细胞内总蛋白。用Western blot检测p-STAT1，STAT1，p-STAT6，STAT6的蛋白变化，并计算p-STAT1/STAT1和p-STAT6/STAT6。<br>　　实验结果：<br>　　（1）M1/M2巨噬模型建立成功，q-PCR结果显示TRPM7在M1型巨噬细胞中高表达，在M2型巨噬细胞中表达降低。这些结果表明TRPM7可能参与RAW264.7极化的过程。<br>　　（2）TRPM7的阻断可以抑制LPS-IFN-γ诱导的TNF-α，iNOS的蛋白表达，增加IL-4诱导的Arg-1，CD206蛋白表达。q-PCR显示相同的结果，TRPM7的阻断可以降低LPS-IFN-γ诱导的M1生物标记物（IL-6,TNF-α,iNOS和CD86）的mRNA表达，增加IL-4诱导的M2生物标记物（IL-10,TGF-β,Arg-1,CD206）的mRNA表达。以上结果提示：阻断TRPM7可以减少巨噬细胞向M1发生极化，增加其向M2型转化。此外，在进一步的试验中发现TRPM7的阻断降低了M1巨噬细胞上清液中IL-6，TNF-α的分泌，增加M2巨噬细胞上清液中IL-10和TGF-β的分泌。<br>　　（3）TRPM7的阻断可以减少LPS-IFN-γ诱导的p-STAT1的蛋白表达，同时降低p-STAT1/STAT1。此外，TRPM7的阻断进一步促进IL-4诱导的p-STAT6蛋白表达，p-STAT6/STAT6发现进一步上升。<br>　　实验结论：<br>　　我们的研究结果发现TRPM7参与了巨噬细胞的极化过程。TRPM7在M1型巨噬细胞中表达增加，TRPM7的阻断抑制了M1型巨噬细胞的极化，而增强了M2型巨噬细胞的极化。TRPM7调控巨噬细胞极化的机制可能通过STAT1/STAT6。