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摘要目的：<br>　　复发性自发性流产（recurrent spontaneous abortion，RSA）主要的致病因素是胎儿染色体核型异常，但仍有50%的RSA未发现明确的病因。母体免疫状态失衡是导致不明原因的复发性自发性流产（unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA）发生的重要原因。多项研究也证实了自身免疫性疾病或自身抗体与URSA之间的密切联系。干细胞样记忆T（stem cell-like memory T，TSCM）细胞是一群具有自我更新能力和多向分化潜能的记忆T（memory T，TM）细胞亚群，与自身免疫性疾病的发生密切相关。但TSCM细胞是否参与URSA的发生发展目前尚未见报道。前期我们检测了少量URSA患者的外周血中TSCM细胞的水平，结果发现在URSA患者外周血中TSCM细胞的比例显著增加。因此，我们推测TSCM细胞可能起到促进URSA的发生和发展的作用。<br>　　方法：<br>　　1.制定RSA病例纳入研究标准，在患者知情同意的情况下，收集患者流产胚胎绒毛，检测胎儿染色体核型，排除因胎儿染色体异常导致的RSA，收集URSA患者的外周血。<br>　　2.分离血浆，得到URSA患者外周血细胞，裂解红细胞后，利用流式细胞术（flow cytometry，FCM）检测URSA患者外周血中总TSCM及CD4+和CD8+TSCM亚群的水平，并分析TSCM上下游的幼稚T（na?ve T，TN）细胞、中枢记忆性T（central memory T，TCM）细胞和效应记忆T（effector memory T，TEM）细胞，以及天然杀伤（natural killer，NK）细胞和B细胞的水平。<br>　　3.利用酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测URSA患者外周血血浆中的自身抗体水平。<br>　　4.将6-8周CBA/J雌性小鼠和DBA/2N雄性小鼠以2∶1合笼，此条件下妊娠的CBA/J雌性小鼠作为经典的URSA小鼠模型；将6-8周CBA/J雌性小鼠和BALB/c雄性小鼠以2∶1合笼，此条件下妊娠的CBA/J雌性小鼠作为正常妊娠对照模型。检到阴栓日记为妊娠0.5日（gestational dayamp;nbsp;0.5，gd0.5）。于gd14.5统计胚胎吸收率，并分离得到外周血、脾脏、子宫远端淋巴结、子宫引流淋巴结和子宫的单细胞悬液，利用FCM分析小鼠TSCM和CD4+TSCM细胞的比例。<br>　　5.将正常妊娠模型小鼠分为两组：安慰剂对照组和IL-7实验组。分别于gd4.5，gd6.5，gd8.5对妊娠的CBA/J小鼠行腹腔注射，IL-7实验组注射用生理盐水稀释的IL-7溶剂2μg/只/天，安慰剂对照组注射等量生理盐水。于gd14.5统计胚胎吸收率。分离得到外周血、脾脏、子宫远端淋巴结、子宫引流淋巴结和子宫的单细胞悬液，利用FCM分析小鼠TSCM和CD4+TSCM细胞的比例。<br>　　6.利用实时荧光定量PCR（real time quantitative PCR，qRT-PCR）分析小鼠的炎症因子IL-6和TNF-α的水平。<br>　　结果：<br>　　1.排除因胎儿染色体核型异常导致的RSA，剩余的URSA患者外周血中的TSCM细胞比例较对照组显著增高，且增高的总TSCM细胞中主要为CD4+TSCM群；TSCM下游的TCM细胞比例也有一定程度的增高，但TN和TEM细胞无明显的变化；NK细胞比例显著增高，但B细胞无明显变化；血浆中的自身抗体水平均有不同程度的增高。<br>　　2.URSA小鼠模型的胚胎吸收率较正常妊娠组显著增高，说明模型构建成功；流产小鼠的外周血、脾脏和子宫的TSCM和CD4+TSCM细胞比例均增高，而淋巴结中的变化不明显。<br>　　3.相较于安慰剂对照组，IL-7实验组显示出各组织器官中的TSCM和CD4+TSCM细胞比例的显著增高，说明IL-7在小鼠体内诱导了全身性的总TSCM和CD4+TSCM细胞的扩增；IL-7实验组的胚胎吸收率较安慰剂对照组显著增高，说明由IL-7诱导的过量的TSCM导致了胚胎吸收率的增高。<br>　　4.qRT-PCR结果显示相较于安慰剂对照组，IL-7实验组的IL-6和TNF-α的表达显著上调。<br>　　结论：<br>　　URSA中增高的CD4+TSCM细胞可能是引起反复流产的原因之一，其致病机制尚有待于进一步研究阐明，TSCM细胞有望成为URSA的检测指标和治疗靶点。