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摘要研究目的：<br>　　观察MRL/lpr小鼠肾脏、脾脏病理情况，并观察MRL/lpr小鼠成骨细胞对于B淋巴细胞的趋化作用，探究CXCL12/CXCR4参与MRL/lpr小鼠B淋巴细胞趋化的机制。<br>　　方法：<br>　　1、本实验中实验动物分为2组：（1）实验组：MRL/lpr小鼠组；（2）对照组：C57BL/6小鼠组。取12周龄的MRL/lpr小鼠与同龄的C57BL/6小鼠脾脏及肾脏，经过固定、包埋等步骤制成病理切片后进行HE染色，镜检并观察比较实验组与对照组小鼠的脾脏及肾脏病理改变。<br>　　2、分别采集或留取MRL/lpr小鼠和C57BL/6小鼠外周血、骨髓、脾脏及肾脏制成细胞悬液，然后进行流式抗体标记，最后上流式细胞仪分析并比较实验组和对照组中外周血、骨髓、脾脏及肾脏中表达CXCR4的B淋巴细胞数量的比例。<br>　　3、分别采集MRL/lpr小鼠和C57BL/6小鼠外周血及骨髓，离心后收集外周血上清及骨髓上清，使用ELISA检测并比较两组小鼠外周血上清及骨髓上清中CXCL12的浓度；留取MRL/lpr小鼠和C57BL/6小鼠的脾脏及肾脏，制成病理切片后进行免疫组织化学染色，镜检观察并比较实验组与对照组的脾脏及肾脏中CXCL12表达的情况。<br>　　4、分别获取MRL/lpr小鼠和C57BL/6小鼠颅骨，并剪成小骨片，采用酶促分离成骨细胞的方法分离并培养成骨细胞至P1代，通过茜素红、碱性磷酸酶染色进行成骨鉴定；分别收集两组小鼠成骨细胞P1代培养液上清，使用ELISA检测培养液上清中CXCL12的浓度，使用Westernblot检测成骨细胞中CXCL12的表达情况。<br>　　5、留取C57BL/6或MRL/lpr小鼠的脾脏并制成细胞悬液，使用免疫磁珠正选试剂盒分选CD19+B淋巴细胞，并检测其纯度；分选后的B淋巴细胞用于Transwell，分组如下：（1）C57BL/6小鼠B淋巴细胞为上层细胞，C57BL/6小鼠成骨细胞为下层细胞；（2）C57BL/6小鼠B淋巴细胞为上层细胞，MRL/lpr小鼠成骨细胞为下层细胞；（3）MRL/lpr小鼠B淋巴细胞为上层细胞，C57BL/6amp;nbsp;小鼠成骨细胞为下层细胞；（4）MRL/lpr小鼠B淋巴细胞为上层细胞，MRL/lpr小鼠成骨细胞为下层细胞。<br>　　6、使用不同浓度的CXCL12拮抗剂预处理MRL/lpr小鼠成骨细胞，再次进行Transwell实验，上室细胞为C57BL/6或MRL/lpr小鼠B淋巴细胞，下室细胞为不同浓度CXCL12拮抗剂处理后的MRL/lpr小鼠成骨细胞。<br>　　7、构建慢病毒载体转染MRL/lpr小鼠成骨细胞下调CXCL12的表达，采用WesternBlot及ELISA检测CXCL12的表达水平，再次进行Transwell实验，上室细胞为C57BL/6小鼠B淋巴细胞，下室细胞分别为C57BL/6小鼠成骨细胞以及转染前后的MRL/lpr小鼠成骨细胞。<br>　　结果：<br>　　1、与C57BL/6小鼠相比，MRL/lpr小鼠的脾脏观察到结构紊乱不清的病理改变，肾脏病理观察到炎症细胞浸润、系膜细胞增生性改变。<br>　　2、与C57BL/6小鼠相比，MRL/lpr小鼠外周血中表达CXCR4的B淋巴细胞比例降低，骨髓、脾脏、肾脏表达CXCR4的B淋巴细胞比例增高；与C57BL/6小鼠相比，MRL/lpr小鼠外周血及骨髓上清中CXCL12表达增高，MRL/lpr小鼠脾脏及肾脏中表达CXCL12增高。<br>　　3、与C57BL/6小鼠相比，MRL/lpr小鼠成骨细胞培养液上清及细胞中表达CXCL12增高。<br>　　4、与下室细胞为C57BL/6小鼠成骨细胞相比，不管是C57BL/6小鼠还是MRL/lpr小鼠的B淋巴细胞向下室为MRL/lpr小鼠成骨细胞的趋化均增多，且以MRL/lpr小鼠B细胞向MRL/lpr小鼠成骨细胞趋化最多。<br>　　5、使用不同浓度CXCL12拮抗剂预处理后，不管是C57BL/6小鼠还是MRL/lpr小鼠B淋巴细胞向MRL/lpr小鼠成骨细胞的趋化均减低。<br>　　6、转染慢病毒shRNA340的MRL/lpr小鼠成骨细胞CXCL12的表达下降，C57BL/6小鼠B淋巴细胞向下调后成骨细胞的趋化减低。<br>　　结论：<br>　　MRL/lpr小鼠外周血、骨髓、脾脏、肾脏中表达CXCR4的B淋巴细胞比例以及表达CXCL12异常；MRL/lpr小鼠B淋巴细胞向高表达CXCL12的MRL/lpr小鼠成骨细胞迁移显著增加，且通过下调CXCL12的表达或加入CXCL12拮抗剂可抑制迁移。本实验证实了MRL/lpr小鼠多个器官表达CXCR4的B淋巴细胞比例以及表达CXCL12存在异常，CXCL12/CXCR4可能参与了MRL/lpr小鼠的B淋巴细胞的异常趋化，为进一步探究狼疮发病机制提供新思路。