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疣状表皮痣临床、皮肤影像特征及发病机制的TMT标记蛋白组学研究

摘要研究背景疣状表皮痣(Verrucousepidermalnevus,VEN)是皮肤科门诊最为常见的疾病之一,其本质上属于一种皮肤良性肿瘤,通常在出生时或出生后不久发病,部分患者皮损在学龄期、青春期或孕期加速生长。疣状表皮痣临床表现主要为密集的乳头瘤样或角化过度性的丘疹,颜色可为正常肤色、红色、棕褐色至黑色,境界清楚,皮疹触之较硬,皱襞处皮疹常因汗液浸渍而较软。临床上通常分为局限型、系统型和炎性线性疣状表皮痣,当疣状表皮痣合并系统症状时称之为表皮痣综合征(EpidermalNevusSyndrome,ENS)。目前为止,大样本量的疣状表皮痣临床特征未见报道,尽管多数研究认为K10、FGFR3和CJA1基因突变可能与疣状表皮痣发生有关,但具体机制仍尚不完全清楚。蛋白质是基因表达的最终产物,也是生命活动的直接体现者,近年来,蛋白组学技术发展迅速,被广发用于探讨复杂疾病的发病机制。蛋白组学是指“一种基因组所表达的全套蛋白质”,即包括一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质,通过蛋白组学进行系统性研究能更好的明确疾病的发生机制。<br>  研究目的纳入121例疣状表皮痣患者作为研究对象,探讨其临床、皮肤影像学特征及利用TMT-标记的蛋白组学技术探讨其发病机制。<br>  研究方法(1)通过纳入121例疣状表皮痣患者作为研究对象,采用自制的疣状表皮痣调查表收集患者的基本临床信息(性别、年龄、发病年龄、家族史、临床类型、皮损分布部位、是否伴有瘙痒等情况);(2)对其中16例疣状表皮痣患者进行皮肤镜检查,12例疣状表皮痣患者进行皮肤CT影像学检查,探讨皮肤镜和皮肤CT影像学特点;(3)利用TMT-标记的蛋白组学技术探讨疣状表皮痣患者皮损中的差异表达蛋白,将所得的差异蛋白在疣状表皮痣患者皮损中进一步进行验证其表达水平,具体为纳入8例疣状表皮痣患者和8例色素痣患者,通过手术获得疣状表皮痣患者的皮损组织(VEN组)和邻近皮损的非皮损组织(VENC组)及色素痣患者色素痣周围的正常组织(C组),通过TMT-标记的蛋白组学技术探讨疣状表皮痣患者(n=5例)皮损与非皮损及正常皮肤组织(n=5例)中的蛋白表达水平,探讨VEN组与VENC组、VENC组和C组、VEN组和VENC组的差异表达蛋白。将VEN组和C组两组中存在显著差异的表达蛋白进一步通过Go分析、KEGG分析和蛋白互作网络(ProteinProteinInteraction,PPI)分析等进行生物信息学分析,筛选出和疣状表皮痣发病机制最可能相关的蛋白进行验证。将所获得的9个蛋白在疣状表皮痣患者(n=3例)中的皮损和非皮损及正常儿童色素痣周围的正常皮肤组织(n=3例)中进行Westernblotting验证,探讨9个蛋白在疣状表皮痣皮损和非皮损及正常皮肤组织中表达水平的差异。<br>  结果(1)局限型疣状表皮痣患者发病年龄较早,皮损部位以头面颈部、躯干和四肢多见,瘙痒不明显,而炎性线性疣状表皮痣患者发病年龄较晚,皮损部位以四肢多见,伴有显著的瘙痒感。局限型疣状表皮痣和炎性线性疣状表皮痣患者在发病年龄、皮损部位及伴有的瘙痒程度上存在显著差异。(2)局限型疣状表皮痣皮肤镜特点以棕色圆形环为主,炎性线性疣状表皮痣皮肤镜特点以粉红色区域和厚的附着鳞屑为主,泛发型疣状表皮痣皮肤镜特点以脑回状结构为主;角化过度、表皮突延长是疣状表皮痣最为常见的皮肤CT表现,对于炎性线性疣状表皮痣患者而言,常常伴有炎性细胞浸润。(3)与正常皮肤组织相比,疣状表皮痣皮损中有399个蛋白显著上调,187个蛋白显著下调,而疣状表皮痣非皮损中有38个蛋白显著上调,43个蛋白显著下调;疣状表皮痣皮损和非皮损相比,有204个蛋白显著上调,117个蛋白显著下调。(4)疣状表皮痣患者皮损中Involucrin、NDUFA4、Loricrin、Filaggrin、S100A7、Desmocolin-3、BRAF和Keratin,typeIIcytoskeletal6A蛋白均显著高表达,涉及到相关的病理生理机制可能与皮肤屏障功能障碍、表皮细胞过度增殖、免疫炎症、氧化磷酸化等有关。<br>  结论本研究发现局限型和炎性线性疣状表皮痣患者在发病年龄、皮损部位和伴有瘙痒严重程度上存在显著差异。棕色圆形环、红色区域、厚的附着鳞屑、脑回状结构是疣状表皮痣的主要皮肤镜特点,角化过度、表皮突延长炎性细胞浸润是疣状表皮痣主要的皮肤CT特点。蛋白组学技术可以很好的探讨未知疾病的发病机制,本研究发现了一些疣状表皮痣相关的致病蛋白,为下一步的功能学研究提供理论依据。

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