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摘要背景和目的:<br>　　胃癌（gastric cancer）是全球第五大常见的恶性肿瘤，死亡率位于全球癌症死亡的第四位，在中国胃癌发生率和死亡率在消化道恶性肿瘤中位于第一位。目前积极的外科手术或者术后辅助化疗是常见的治疗手段，但是许多胃癌仍预后不佳，主要的原因可能是由于早期胃癌不易诊断。现阶段胃癌检测的最常用的方法依旧是侵入性和昂贵的病理检查，因此我们迫切需要发现新的生物标志物进行早期诊断以及更全面地了解胃癌发生发展中的分子机制，从而战胜这种毁灭性的疾病。<br>　　2011年竞争性内源性RNA（competitive endogenous RNA，ceRNA）假说第一次被提出，这种新的ncRNA与编码信使RNA之间的调控机制彻底打破了人们对RNA的传统认识。即在传统的miRNA转换为RNA的传统模式作用基础下，两者之间还存在着一定的反向转换的作用模式，ceRNA在肿瘤发生发展等病理过程中发挥着关键作用。因此，筛选与鉴定胃癌相关ceRNA分子具有重要意义。<br>　　本课题通过TCGA数据库下载正常组织及胃癌组织miRNA及RNA Seq，通过生物信息分析筛选出差异性的lncRNA及miRNA并得出胃癌相关lncRNA/miRNA通路图，通过阅读大量相关文献，挑选出本实验所研究的lnc-ARHGEF26-AS1/miR-373路线，验证目标lncRNA在胃癌组织/癌旁组织及胃癌细胞/正常胃粘膜细胞中是否存在差异表达，探索目标lncRNA在胃癌组织中表达意义和今后作为新型分子标志物的可能并验证目标lncRNA与目标miRNA之间在胃癌细胞中可能存在着的调控表达关系。<br>　　方法:<br>　　1.自2019年3月到2019年8月期间，从宁波市临床病理诊断中心总共收集了40对福尔马林固定石蜡包埋的胃癌组织及其癌旁组织标本进行本课题的研究，每个标本各取1cm立即浸入-80℃的RNA保存液保存至使用。<br>　　2.设计并合成miRNA引物，U6内参引物，si-ARHGEF26-AS1，mimics-miR-37、阴性对照组NC（negative control）及lnc-ARHGEF26-AS1引物；<br>　　3.培养正常胃粘膜细胞（GES），胃癌细胞株（BGC和SGC）和经NC，mimics-miR-373及si-ARHGEF26-AS1转染的胃癌细胞株BGC。<br>　　5.采用FFPE RNA试剂盒从福尔马林固定石蜡包埋样本中提取组织总RNA，使用Trizol法提取细胞总RNA。<br>　　6.利用GoScript逆转录(RT)系统及Hairpin-itTM miRNA定量和U6校准试剂盒方法合成互补DNA(cDNA)。<br>　　7.采用荧光实时定量PCR技术（quantitative，reverse transcription-polymerase reaction,qRT-PCR）反应扩增cDNA，每个样板均重复三次消除随机误差，最终测序确认qRT-PCR产物。<br>　　8.通过qRT-PCR检测胃癌组织和对应的癌旁组织，胃癌细胞株及对应正常胃粘膜细胞中lnc-ARHGEF26-AS1的表达水平，分析其表达水平是否有差异性。<br>　　9.通过qRT-PCR检测经阴性对照组及mimics-miR-373引物转染后胃癌细胞株中lnc-ARHGEF26-AS1的表达水平，分析其表达水平是否有差异性。<br>　　10.通过qRT-PCR检测阴性对照组及si-ARHGEF26-AS1转染后胃癌细胞株miR-373的表达情况，分析其表达水平是否有差异性。<br>　　11.采用GraphPad Prism8.0软件分析lnc-ARHGEF26-AS1的表达水平与临床病理因素之间的关系并绘制图形。<br>　　12.构建受试者工作特征曲线（receive operating characteristic，ROC），分析评估lnc-ARHGEF26-AS1诊断价值；<br>　　结果:<br>　　1.对比癌旁组织，lnc-ARHGEF26-AS1在胃癌组织中明显上升（P＜0.0001）；对比正常胃粘膜上皮细胞GES，lnc-ARHGEF26-AS1在胃癌细胞SGC（P=0.0491）及胃癌细胞BGC（P=0.0101）的表达水平均明显升高；<br>　　2.在胃癌细胞BGC中，下调lnc-ARHGEF26-AS1后，miR-373表达上升（P=0.0013）；上调miR-373后，lnc-ARHGEF26-AS1表达下降（P=0.025），提示lnc-ARHGEF26-AS1与miR-373在胃癌细胞中存在反向相互调控的关系。<br>　　3.通过统计分析临床病理资料，得到lnc-ARHGEF26-AS1表达水平与年龄(P=0.0291)、浸润深度(P＜0.0001)显著相关。<br>　　4.建立ROC曲线，曲线下面积(AUC)为0.64，提示lnc-ARHGEF26-AS1对胃癌的诊断存在预测价值。<br>　　结论:<br>　　经过试验证实lnc-ARHGEF26-AS1在胃癌组织中表达上调可能在胃癌的生长及分化过程及胃癌的诊治具有一定的意义，并且lnc-ARHGEF26-AS1，miR-373可能以ceRNA角色构成lnc-ARHGEF26-AS1/miR-373通路参与胃癌细胞的发生发展。