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摘要CD46/MCP又称膜辅蛋白（membrane cofactor protein,MCP），最早发现是补体调节蛋白（complement regulatory proteins,CRP）家族中的一员，参与调解补体激活途径，保护自身组织和细胞。随后发现CD46在T细胞调节、病原受体、诱导自噬等方面具有重要作用。但是硬骨鱼类CD46的研究报道较少，特别是关于CD46异构体功能的研究鲜有报道。本研究通过克隆及测序获得了香鱼（Plecoglossus altivelis,ayu）CD46三个异构体（PaCD46-1、PaCD46-2、PaCD46-3）cDNA序列。三个异构体均含有一个信号肽序列（signal peptide），4个保守的短同源重复序列结构域（short consensus repeats,SCRs），可变的富含丝氨酸-苏氨酸-脯氨酸的结构域（serine-threonine-proline-rich domain），跨膜疏水性结构域（transmembrane hydrophobic domain）和胞质尾部（cytoplasmic tail）组成。氨基酸序列多重比对显示，三个异构体具有相同的SCRs区；不同物种CD46比较显示，这几个结构域中，4个SCRs是最保守的区域。系统进化树分析表明，PaCD46三个异构体与鱼类CD46形成一簇，继而与哺乳动物CD46形成一大簇。通过cDNA和基因组DNA序列分析显示，PaCD46基因包含11个外显子，10个内含子。PaCD46-1缺少外显子7，PaCD46-2缺少外显子10，因此三个异构体由选择性剪切形成。然后选择PaCD46异构体胞外区进行毕赤酵母真核表达，获得重组PaCD46胞外区蛋白（recombinant PaCD46extracellular domain,rPaCD46ex）。将纯化的重组蛋白免疫兔子，获得PaCD46ex抗体。接着蛋白免疫印迹（Western blotting）检测外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC），结果显示三个特异性条带，且分子量均大于各自异构体的理论值。随后体外溶血实验证明，rPaCD46ex显着降低了香鱼血清的溶血活性。进一步构建了分别表达了PaCD46三种异构体的HEK293细胞。流式细胞技术检测表明，表达PaCD46异构体的三种细胞均可显著降低补体激活造成的细胞损伤量。最后抗体封闭实验表明，PaCD46异构体可以保护自体PBMC免于补体激活的损伤。上述结果表明PaCD46异构体是补体调节蛋白，可防止补体激活对自身组织或细胞的损伤。