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摘要背景和目的<br>　　缰核属于上丘脑，位于松果体首端、丘脑背内侧的缰三角内，又分为内侧缰核（MHb）和外侧缰核(LHb)。缰核的主要生理功能为调控机体的昼夜节律和恐怖反应。新近的研究表明，外侧缰核与负性情绪的编码和抑郁症的病理生理有关。最新出现的证据表明，氯胺酮可以阻断外侧缰核神经元的簇状放电，以快速缓解抑郁症。因此，外侧缰核神经元的簇状放电可能是治疗抑郁症的重要靶点。已有的证据表明，大麻素2型受体（CB2R）激动剂GW405833(GW)和抗癫痫药拉莫三嗪(LTG)均能有效治疗抑郁症。然而，这两种药物对外侧缰核神经元的调节及其作用机制尚不清楚。本课题研究了GW和LTG对外侧缰核不同亚型神经元放电的影响，为揭示其抗抑郁作用的靶点和机制提供实验依据。<br>　　材料与方法<br>　　1、动物：2-6周的C57BL/J6小鼠，野生型（WT）小鼠。<br>　　2、脑片准备：制备含有外侧缰核脑区和含有VTA脑区300μm的冠状切片，用于膜片钳记录。<br>　　3、脑片膜片钳全细胞记录：在红外相差干涉显微镜下，利用脑片膜片钳进行膜片钳全细胞记录外侧缰核神经元和VTA多巴胺神经元的电生理数据，并检测拉莫三嗪和GW对其作用。<br>　　4、数据统计分析：膜片钳数据的采集使用pClamp10.7，数据分析使用Clampfit10.7。另外，其他数据分析使用Excel，SPSS，GraphPadPrism7等软件。给药前后使用配对t检验进行统计分析，两组以上则用单因素方差分析。数据用平均值±标准误差来表示（平均值±S.E.M）。<br>　　结果<br>　　1、本实验在外侧缰核共记录到188个细胞，根据其放电模式和膜电位可以将其分为三类：静息型神经元（Silent），其膜电位大约在-55mV，强直放电型神经元（Tonic），其膜电位大约在-43mV，和簇状放电神经（Burst），膜电位大约在-60mV，它们的比例大概为45％：46％：9％。<br>　　2、拉莫三嗪30μM可以提高外侧缰核Tonic神经元兴奋性，主要通过使神经元膜电位去极化，使绝对值变小（P=0.0001,n=28）。而拉莫三嗪10μM对神经元电生理特征的影响没有统计学意义（P=0.3419,n=12）。<br>　　3、拉莫三嗪10μM可以抑制外侧缰核Silent神经元兴奋性，主要延长其触发动作电位时间和提高元动作电位适应指数（P=0.001,n=14）。<br>　　4、拉莫三嗪30μM可以减少外侧缰核诱发的簇状放电数目（P=0.0015,n=6），并且随着灌流给药时间的增加抑制效果增强，在给药9min时达到最佳效果。使后超极化电位的绝对值增大（P=0.0015,n=6），从而抑制神经元簇状放电。而拉莫三嗪10μM对簇状放电的影响没有统计学意义（P=0.0549,n=8）。<br>　　5、CB2R激动剂GW10μM可以抑制外侧缰核Tonic神经元兴奋性，灌流给药后表现为神经元兴奋阈强度绝对值变大（P=0.0003,n=16）、静息膜电位绝对值变大（P=0.039,n=16），神经元放电频率降低（P=0.0141,n=16）。<br>　　6、GW50μM可以抑制外侧缰核Silent神经元兴奋性，表现为降低神经元放电频率（P=0.0063,n=4）和延长触发动作电位时（P=0.0012,n=4）。<br>　　7、GW10μM对外侧缰核诱发的簇状放电有抑制作用，包括减小其后超极化电位的绝对值（P=0.0092,n=12）、并使簇状放电的峰内信号个数变少（P=0.0092,n=12）。<br>　　8、GW10μM可以抑制NMDA诱发多巴胺神经元簇状放电。GW10μM可以增强SK电流，SK通道阻断剂(Apamine)几乎可以完全阻断SK电流。CB2R阻断剂AM630可去除GW的增强作用，AM630自身对照对SK电流没有影响。<br>　　结论<br>　　我们实验结果表明拉莫三嗪可以抑制外侧缰核神经元的簇状放电，对Tonic神经元活性具有增强作用，对Silent神经元活性具有抑制作用。另外GW可以抑制外侧缰核神经元的诱发的簇状放电和对Tonic神经元和Silent神经元具有抑制作用。GW可增强SK电流，而CB2R阻断剂AM630可去除GW的增强作用。AM630自身对照对SK电流没有影响，但SK电流可被Apamine几乎全部阻断。所以，激活CB2Rs可抑制NMDA诱发的SK增强，这可能是CB2R介导对神经元簇状放电抑制的重要机制之一。