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可降解锌与锌合金材料细胞相容性及促成骨性能研究

摘要目的:金属锌因其具有良好的生物安全性、机械性能和可降解性,是理想的骨创伤修复金属材料之一。本次研究旨在通过体内、体外实验研究分析锌与锌合金的材料的细胞相容性、促成骨能力及其相关的基因、蛋白的表达,为以后锌金属材料发展为新型理想骨科植入材料研发及临床应用提供实验基础支持。<br>  方法:为了改善纯锌的机械性能,提高其促成骨性能,本实验材料制备时在锌中添加适量的合金元素镁、铜(各2wt.%)制备成二元或三元锌合金。实验分为体外细胞实验与体内动物实验两部分。体外细胞实验有Zn、Zn-2Mg、Zn-2Cu、Zn-2Mg-2Cu共4组实验组、使用普通α-MEM全培培养基作为空白对照组和使用含诱导成骨成分的α-MEM全培培养基作为阳性对照组。直接实验将MC3T3-E1细胞直接种植在各实验组材料表明,进行死-活染色。间接实验将实验组浸提液和对照组培养液与MC3T3-E1细胞共培养后,分别进行CCK-8细胞活性检测、碱性磷酸酶染色、茜素红染色、RT-PCR、蛋白电泳等实验。动物实验部分以6只成年雄性新西兰大白兔为研究对象制作右股骨髁骨缺损模型,实验组将Zn-2Mg合金多孔支架植入骨缺损处,空白对照组则骨缺损处不予植入物填充,术后1个月将实验兔子进行安乐处死并取材,行影像学及组织学染色观察评估骨缺损修复情况。<br>  结果:体外直接接触试验结果表明,MC3T3-E1细胞直接种植在Zn、Zn-2Mg、Zn-2Cu、Zn-2Mg-2Cu实验组材料表面短时间内会逐渐出现死亡。间接实验部分,CCK-8细胞活性检测结果显示20%、10%浓度实验组细胞活性在第5天时均大于1。在碱性磷酸酶染色、茜素红染色实验中,20%浓度实验组染色更明显,定量分析结果具有统计学差异(P<0.05)。RT-PCR、蛋白电泳检测示20%浓度的Zn-2Mg和Zn-2Mg-2Cu组成骨增殖相关的ALP、Col1-α1基因和蛋白表达上调(P<0.05),各实验组成骨分化相关的RUNx-2基因和蛋白表达无差异。体内实验将Zn-2Mg合金多孔支架植入兔子股骨髁缺损模型中,与空白缺损对照组相比,影像学结果和苏木精-伊红染色法显示Zn-2Mg合金多孔支架组股骨髁缺损处在术后1个月时,有新的骨皮质、骨小梁生成,骨缺损修复效果更佳。<br>  结论:可降解的锌与锌合金材料在本次实验中表现出良好的细胞相容性,与空白对照组相比均具有更好的促成骨性能。在合适浓度范围内,锌离子浓度越高,促成骨细胞增殖、矿化、迁移能力越强。其中锌镁合金组的促成骨性能相对其他实验组更优越,在生物体内具有良好相容性,促进骨缺损修复。因此锌镁合金材料有望成为骨科植入材料的新选择,特别是用于骨缺损和骨折修复领域。

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