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摘要背景与目的<br>　　研究背景：食管癌是世界范围内最高发的恶性肿瘤之一，根据最新的全球流行病学调查结果，2020年全球范围内估计有604,000新发食管癌病例，发病率排名第七，而死亡率排名第六，估计约有544,000患者因食管癌死亡。相较于2018年的统计数据，新发病例数和因食管癌死亡的患者人数均有所上升。值得注意的是，中国人目前依旧是世界范围内食管癌的主要患病人群，直到2015年，食管癌的发病率在中国男性和女性癌症患者中分别排在第三位和第五位，癌症相关死亡率排在所有恶性肿瘤中的第四位。中国广东省东部的潮汕地区食管癌也高发，尤以南澳岛为著。因此，研究食管在癌变各阶段的病理学变化将对食管癌的诊治产生重要的价值。<br>　　本课题组前期研究中已发现了食管鳞状细胞癌患者手术切除的食管组织以及潮汕地区食管鳞癌高危人群的内镜普查样本中均存在不同程度的慢性炎症。进一步研究发现食管癌变过程伴随着IgA表达的增多，同时炎细胞聚集的部位以及癌前病变部位的食管上皮基膜也存在不同程度的破坏。人体内IgA分为A1、A2两个亚型，二者既可以是单体型也可以是二聚体，本课题主要研究二聚体IgA（分泌型IgA）。<br>　　研究目的：首先通过免疫组化观察IgA1、IgA2及基膜、半桥粒成分（laminin-γ2和integrin-β4）在食管不同癌变阶段（正常、单纯增生、异型增生、浸润癌）组织中的表达差异。<br>　　其次将课题组前期食管不同癌变阶段转录物测序数据与GTEx数据库正常食管转录物测序数据进行免疫细胞亚群分析；同时针对IgA、基膜成分、基质金属蛋白酶（MMP）、活性氧物质合成酶相关编码基因的表达谱进行差异表达分析。<br>　　最后利用课题组已构建的小鼠食管癌变模型采用透射电镜和免疫组化观察基膜、半桥粒超微结构的变化及其成分laminin-γ2和integrin-β4的表达变化；同时，在正常食管上皮永生化细胞系NE6中观察活性氧物质刺激对细胞增殖、迁移能力以及laminin-γ2、integrin-β4表达的影响。<br>　　材料与方法<br>　　材料<br>　　1、样本收集：本研究共收集73例食管鳞状细胞癌患者的189个标本（包括食管癌远端食管黏膜、癌旁食管黏膜和癌组织）以及26例尸检来源的正常食管组织样本；<br>　　2、转录物测序数据包括GTEx数据库筛选的80例正常食管黏膜组织转录物测序数据，以及课题组前期已测的72例食管不同癌变阶段样本转录物测序数据（包括正常对照、单纯增生、异型增生和浸润癌组织）；<br>　　3、购自北京维通利华实验动物技术有限公司的C57纯系小鼠和由香港大学生物医学系曹世华教授惠赠的正常食管鳞状上皮永生化细胞系NE6。<br>　　方法<br>　　1、本研究利用食管组织样本的石蜡切片，通过HE染色观察细胞形态、评判病变类型以及炎症等级；使用免疫组织化学（IHC）染色方法对食管组织中CD38、IgA、IgA1、IgA2、laminin-γ2和integrin-β的表达进行检测；<br>　　2、利用食管组织的转录物测序数据，通过CIBERSORT分析样本中免疫细胞的构成，同时应用EdgeR分析各组间基因的差异表达；<br>　　3、利用课题组已构建的C57小鼠食管癌变模型，应用HE、IHC染色观察食管癌变过程中组织形态的变化，以及IgA、laminin-γ2和integrin-β4的表达变化；采用透射电镜观察半桥粒超微结构的变化；同时在NE6细胞系中通过H2O2、4NQO刺激细胞，应用划痕实验、CCK8、克隆形成实验、免疫荧光染色、western-blot实验，观察细胞的增殖、迁移能力及laminin-γ2、integrin-β4表达的变化。<br>　　结果<br>　　1、IHC染色和转录物测序数据的分析结果均表明在正常食管和不同癌变阶段（正常、单纯增生、异型增生、浸润癌）组织中IgA、IgA1、IgA2、laminin-γ2和integrin-β4的表达随癌变进展和炎症等级的加重而增高；IgA1的表达均高于IgA2，且IgA1与IgA2的比值在浸润癌组织中显著增高；<br>　　2、在食管不同癌变阶段组织中，基膜的损伤伴随IgA阳性炎细胞、中性粒细胞的浸润以及laminin-γ2、integrin-β4表达的升高；同时在食管不同癌变阶段组织的转录物测序数据分析结果表明IGHA1、IGHA2、LAMC2、ITGB4基因（分别为IgA1、IgA2重链恒定区，laminin-γ2、integrin-β4的编码基因）的转录水平与食管癌变阶段、浆细胞含量、中性粒细胞含量呈正相关；<br>　　3、在浸润癌组织中，IgA和IgA1在癌巢边缘癌细胞的IHC染色呈阳性；laminin-γ2和integrin-β4可在癌巢边缘癌细胞或所有癌细胞中表达；<br>　　4、小鼠异型增生的食管组织中半桥粒形态畸形且分布不均；活性氧物质的刺激促进NE6细胞增殖，上调laminin-γ2和integrin-β4的蛋白表达，并且发生了integrin-β4表达定位从细胞膜到细胞浆的改变。<br>　　结论<br>　　1、食管鳞状细胞癌变过程中IgA1和IgA2的表达逐渐升高，且IgA1为优势亚型；<br>　　2、IGHA1、IGHA2、LAMC2和ITGB4基因的转录水平与食管癌前病变组织中浆细胞和中性粒细胞的构成呈正相关；<br>　　3、基膜和半桥粒的超微结构被破坏是食管癌变的早期事件，食管慢性炎症微环境可能对食管癌前病变组织中半桥粒结构和相关蛋白表达的改变起到一定促进作用。