幽门螺杆菌感染和根除对胃肠道菌群的影响及益生菌的调节作用-论文-万方医学网

幽门螺杆菌感染和根除对胃肠道菌群的影响及益生菌的调节作用

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摘要背景与目的： 　　胃癌是世界上第五大常见的恶性肿瘤，其发生是多因素多步骤过程，受到遗传因素、环境因素和幽门螺杆菌（Hp）感染的影响。Hp是常见的胃内致病菌，感染了全球50%以上的人口，与慢性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织（MALT）淋巴瘤及胃癌的发生密切相关，几乎100%的Hp感染者有慢性活动性胃炎，然而仅1-3%的Hp感染者最终发展成了胃癌，说明存在除了Hp以外的潜在因素在胃癌发生过程中发挥重要作用。近年来，大量研究证实菌群与疾病的发生发展密切相关。胃癌发生过程中胃内菌群的紊乱也逐渐被关注，然而，目前研究主要为对胃黏膜菌群的研究，而缺乏对胃液菌群的研究。此外，胃内微环境变化（包括胃酸、菌群和代谢产物）与胃癌发生的风险之间的关联也需要进一步研究。Hp感染影响宿主胃肠道菌群结构，可能参与了Hp诱导的胃内炎症和胃癌发生。既往研究表明益生菌可以抑制炎症，调节免疫和菌群。益生菌抑制Hp感染诱导的炎症已有报道，然而益生菌对Hp感染介导的胃癌发生风险的影响尚未见文章报道。根除Hp能够显著降低胃癌发生风险，根除方案中包含的PPI和抗生素已被证实可以影响胃肠道菌群。胃肠道菌群紊乱与疾病发生关系密切，因此大规模根除Hp应该考虑对于胃肠道菌群的影响。 　　因此，本论文的目的是基于人体水平研究胃内微环境（胃酸、胃黏膜菌群、胃液菌群、代谢产物）改变与胃癌发生风险的关联，以及根除Hp对人体胃肠道菌群的短期和长期影响；基于动物水平研究益生菌对于Hp感染小鼠胃癌发生风险的影响和可能机制，以及益生菌对于根除Hp后胃肠道菌群、肠道屏障功能及短链脂肪酸含量的调节作用。 　　材料与方法： 　　1.收集胃炎、肠上皮化生（肠化）、胃癌患者的胃黏膜、胃液样本，提取样本DNA，扩增目标16SrRNAV4可变区片段，混样，纯化、建库后完成上机准备。基于IlluminaMiSeq高通量测序平台进行双末端测序，应用生物信息学方法分析胃黏膜和胃液菌群结构变化。应用笔形pH计检测胃液pH,盐酸萘乙二胺法检测胃液亚硝酸盐含量，循环酶法检测胃液中总胆汁酸含量，气相色谱分析法检测胃液中各短链脂肪酸含量。 　　2.构建HpPMSS1感染的INS-GAS小鼠模型，布氏肉汤灌胃的INS-GAS小鼠作为对照组，分别给予含唾液乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的益生菌饮水和普通饮水。处死小鼠前一天收集粪便样本，处死小鼠后，应用笔形pH计测量小鼠胃内pH，取小鼠胃组织。Steiner银染法检测小鼠胃内Hp定植，HE染色观察小鼠胃内病理改变，免疫组化染色检测胃组织炎症指标CD45表达。提取小鼠胃组织和粪便DNA，扩增目标16SrRNAV3-V4可变区片段，混样，纯化、建库后完成上机准备。基于IlluminaMiSeq高通量测序平台进行双末端测序，应用生物信息学方法分析小鼠胃内和肠道菌群结构变化。提取小鼠胃组织RNA，富集mRNA，将mRNA片段化后反转合成cDNA，连接adaptor后进行片段筛选和文库富集，在IlluminaHiSeqXten高通量测序平台上机测序。应用生物信息学方法分析胃组织转录水平的变化。使用RT2ProfilerPCRArray方法分析小鼠胃组织“炎症应答和自身免疫”相关基因的表达情况，并使用蛋白质印迹法检测胃组织炎症免疫相关蛋白TLR2和IL-17的表达。 　　3.招募无症状的年轻成年志愿者，13C尿素呼气试验检测志愿者Hp感染状态，收集志愿者粪便。对Hp阳性志愿者进行内镜检查并取胃黏膜样本，之后给予Hp阳性者14天铋剂四联方案（艾司奥美拉唑20mg，枸橼酸铋钾220mg，阿莫西林1000mg，呋喃唑酮100mg，均为bid）根除Hp，在根除结束后4周时复查13C尿素呼气试验，收集Hp根除志愿者粪便，对Hp根除志愿者进行内镜检查并取胃黏膜样本。根除结束后24周，收集Hp根除志愿者粪便，对Hp根除志愿者进行内镜检查并取胃黏膜样本。提取志愿者胃黏膜和粪便DNA，扩增目标16SrRNAV3-V4可变区片段，混样，纯化、建库后完成上机准备。基于IlluminaMiSeq高通量测序平台进行双末端测序，应用生物信息学方法分析志愿者胃肠菌群结构变化。 　　4.构建HpPMSS1感染的C57BL/6小鼠模型，布氏肉汤灌胃的C57BL/6小鼠作为对照组，分别给予Hp根除药物和生理盐水处理14天。给予根除药物处理结束的小鼠益生菌（屎肠球菌R0026和枯草芽孢杆菌R0179）处理4周。收集根除药物处理结束时和益生菌处理结束时的小鼠粪便、胃黏膜和结肠样本。应用Giemsa染色法检测小鼠胃内Hp定植情况，HE染色观察小鼠胃组织炎症和病理情况。提取小鼠胃组织和粪便DNA，扩增目标16SrRNAV3-V4可变区片段，混样，纯化、建库后完成上机准备。基于IlluminaMiSeq高通量测序平台进行双末端测序，应用生物信息学方法分析小鼠胃内和肠道菌群结构变化。应用气相色谱法检测小鼠粪便各SCFA含量，蛋白质印迹法检测小鼠结肠组织紧密连接蛋白Occuludin和Claudin1的表达。 　　结果： 　　（一）胃癌发生过程中的胃内菌群结构和特定代谢产物变化及其与幽门螺杆菌的关系 　　1.胃癌发生过程中胃黏膜菌群的变化 　　（1）α多样性分析：胃炎患者胃黏膜菌群的Chao指数和Shannon指数与肠化患者均无显著差异（P＞0.05），胃癌患者胃黏膜菌群的Chao指数显著高于胃炎胃黏膜组（P＜0.01）和肠化胃黏膜组（P＜0.001），Shannon指数也显著高于胃炎胃黏膜组（P＜0.01）和肠化胃黏膜组（P＜0.01）。胃癌旁组织和癌组织菌群Chao指数无显著差异，而胃癌胃黏膜组的Shannon指数显著高于癌旁胃黏膜组（P＜0.05）。此外，我们还将胃癌旁和胃炎患者胃黏膜菌群α多样性进行比较，发现癌旁胃黏膜组Chao指数显著高于胃炎胃黏膜组（P＜0.05），Shannon指数无显著差异。Hp感染患者的胃黏膜菌群Chao指数（P＜0.001）和Shannon指数（P＜0.001）显著降低。胃炎组和肠化组中Hp阳性者Chao指数和Shannon指数均显著低于Hp阴性者（allP＜0.001）。然而，在胃癌患者组，Hp阳性与Hp阴性者胃黏膜菌群的Chao指数和Shannon指数均无显著差异。 　　（2）β多样性分析：基于不同距离算法的PCoA分析，发现胃炎胃黏膜组和肠化胃黏膜组的样本不能有效区分开，而胃癌胃黏膜组和其他两组样本有明显分离的趋势（ANOSIM，Bray-curtisP=0.001，weightedUniFracP=0.001）。胃癌组织胃黏膜样本于癌旁样本呈分离的趋势（ANOSIM，Bray-curtisP=0.07，weightedUniFracP=0.02）。癌旁和胃炎患者胃黏膜菌群结构存在显著差异（ANOSIM，Bray-curtisP=0.01，weightedUniFracP=0.03）。Hp阳性组与Hp阴性的胃黏膜样本成明显分离的状态（Adonis，EuclideanP=0.001;ANOSIM，weightedUniFracP=0.001）。其中胃炎组（Adonis，EuclideanP=0.001;ANOSIM，weightedUniFracP=0.001）和肠化组（ANOSIM，Bray-curtisP=0.001，weightedUniFracP=0.001）里Hp阴性和阳性样本分离效果很好，而胃癌组次之（ANOSIM，Bray-curtisP=0.057，weightedUniFracP=0.002）。 　　（3）LEFSe分析：胃炎组中Bacillus显著高于其他肠化组和胃癌组，而在胃癌阶段，Lactobacillus，Prevotella，Veillonella，Haemophilus，Fusobacterium，Neisseria等菌属相对丰度显著升高。胃癌组织中Clostridia，Prevotella_7，Prevotella，Johnsonella，Solobacterium等相对丰度显著高于癌旁组织。胃炎胃黏膜组中Bacillus相对丰度显著高于癌旁组，而癌旁胃黏膜菌群中包括Lactobacillus，Prevotella_7，Veillonella，Fusobacterium，Neisseria等相对丰度升高。Hp阳性胃黏组中仅Helicobacter相对丰度显著高于Hp阴性胃黏膜组，而Bacillus，Lactobacillus，Rothia，Streptococcus，Fusobacterium等菌属相对丰度显著降低。在胃炎、肠化和胃癌三个阶段，Hp阴性亚组中Helicobacter相对丰度均显著低于Hp阳性亚组，而Hp阴性胃炎胃黏膜组中Lactococcus，Bacillus，Pseudomonas，Streptococcus，Neisseria等菌属相对丰度显著高于Hp阳性亚组。Hp阴性肠化胃黏膜组中Lactococcus，Bacillus，Acinetobacter，Streptococcus，Ralstonia等菌属相对丰度显著高于Hp阳性肠化胃黏膜组。相比于Hp阳性胃癌胃黏膜组，Hp阴性胃癌胃黏膜组中Streptococcus，Brevibacterium，Ochrobactrum，Ralstonia，和Rothia等菌属相对丰度显著升高。 　　2.胃癌发生过程中胃液菌群的变化 　　（1）α多样性分析：胃炎胃液组的Shannon指数与肠化胃液组无显著差异，肠化胃液组的Shannon指数与胃癌胃液组无显著差异，而胃癌胃液组的Shannon指数显著低于胃炎胃液组（P＜0.01）。Hp阴性和阳性的患者胃液菌群Chao指数和Shannon指数均无显著差异。Hp阳性胃炎胃液组的Chao指数和Shannon指数与Hp阴性胃炎胃液组均无显著差异；Hp阳性的肠化胃液组的Chao指数和Shannon指数与Hp阴性肠化胃液组均无显著差异，然而Simpson指数显著低于Hp阴性肠化胃液组（P＜0.05）。 　　（2）β多样性分析：基于非加权的UniFrac距离的PCoA显示胃炎和肠化组胃液样本比较接近，而胃癌组呈分离的趋势（ANOSIM，unweightedUniFracP=0.001），而基于加权UniFrac距离的PCoA分析中三组样本非常接近，难以有效区分开（ANOSIM，weightedUniFracP=0.17）。基于非加权的UniFrac距离的PCoA中Hp阳性和Hp阴性的样本距离非常接近（ANOSIM，weightedUniFracP=0.399），而基于加权UniFrac距离的PCoA分析显示Hp阳性和阴性胃液菌群具有显著差异（ANOSIM，weightedUniFracP=0.001）。基于Euclidean距离和weightedUniFrac距离的PCoA分析发现Hp阳性和阴性的胃炎胃液组样本分布具有显著差异（ANOSIM，EuclideanP=0.02，weightedUniFracP=0.018）。同样，基于Euclidean距离和weightedUniFrac距离对肠化和胃癌胃液的样本进行PCoA分析，结果显示：Hp阳性和Hp阴性的肠化胃液样本的分布具有显著差异（ANOSIM，EuclideanP=0.001，weightedUniFracP=0.001），而Hp阳性和Hp阴性的胃癌胃液样本分布无显著差异（ANOSIM，EuclideanP=0.06，weightedUniFracP=0.17）。 　　（3）LEFSe分析：胃炎阶段Pseudomonas，methylobacterium，Treponema_2，Pelomonas，Acidovorax等菌属相对丰度显著高于肠化和胃癌阶段，而在肠化阶段Ochrobactrum，Campylobacter，Acinetobacter，Paracoccus和Staphylococcus等菌属相对丰度显著高于胃炎和胃癌阶段，在胃癌胃液菌群中Lactobacillus，Brevundimonas，Enhydrobacter，Megasphaera等菌属相对丰度显著高于胃炎和肠化组。Hp阳性组胃液菌群中Helicobacter，Selonomonas_4，Corynebacterium，Defluviitaleaceae_UCG_011等菌属相对丰度显著高于Hp阴性组，而Streptococcus，Haemophilus，Gemella等菌属相对丰度显著降低。Hp阳性胃炎胃液组中Helicobacter相对丰度显著高于Hp阴性胃炎胃液组，而Bosea，Corynebacterium和Stenotrophomonas等菌属相对丰度显著下降。与Hp阴性肠化胃液组相比，Hp阳性的肠化胃液组中Helicobacter，Achromobacter相对丰度显著升高，而Streptococcus，Veillonella，Gemella，Rothia，Granulicatella等菌属相对丰度显著降低。在胃癌阶段，Hp阳性的胃癌胃液组中Helicobacter，Rikenellaceae_RC9_gut_group相对丰度显著高于Hp阴性胃癌胃液组，而Corynebacterium相对丰度显著低于Hp阴性胃癌胃液组 　　3.胃癌发生过程中胃黏膜和胃液菌群特征比较 　　（1）总体样本比较 　　（a）α多样性分析：胃黏膜菌群Observedspecies指数（P＜0.05）和Shannon指数（P＜0.001）显著低于胃液菌群。胃癌胃黏膜菌群Chao指数相比于其他5组显著升高（P＜0.001）。在胃炎→肠化→胃癌这一过程，Shannon指数在胃液中呈逐渐下降的趋势，而在胃黏膜中呈逐渐上升的趋势。 　　（b）β多样性分析：胃黏膜样本和胃液样本菌群具有显著差异（ANOSIM，unweightedUniFracP=0.001，weightedUniFracP=0.001）。基于Euclidean距离和Bray-curtis距离对胃炎、肠化和胃癌阶段的胃黏膜和胃液样本进行PCoA分析，发现胃炎组和肠化组胃黏膜样本与胃炎组和肠化组的胃液样本显著分离，三组胃液样本无法有效区分开，胃癌胃黏膜组样本与胃炎、肠化胃黏膜组样本有显著分离的趋势，并且有更靠近胃液样本的趋势（ANOSIM，EuclideanP=0.001，Bray-curtisP=0.001） 　　（c）LEFSe分析：胃黏膜菌群中Helicobacter，Lactococcus，Bacillus，Pseudomonas和Geobacillus等菌属相对丰度显著高于胃液菌群，而Nesseria，Fusobacterium，Prevotella，Streptococcus和Veillonella等菌属相对丰度显著低于胃液菌群。对胃炎、肠化和胃癌阶段的胃黏膜和胃液菌群进行6组的LEFSe分析，结果显示：胃炎胃黏膜组中Bacillus显著高于其他组，肠化胃黏膜组中Pesudomonas，Thermus相对丰度显著升高，胃癌胃黏膜组Acinetobacter和Johnsonella相对丰度显著升高。胃炎胃液中Alloprevotella，Veillonella，Peptostreptococcus，Granulicatella和Actinomyces等菌属相对丰度显著升高，肠化胃液组中Haemophilus，Neisseria，Ochrobactrum，Campylobacter，和Rothia等菌属相对丰度显著升高，胃癌胃液组中Prevotella，Fusobacterium，Leptotrichia，Brevundimonas和Megasphaera等菌属相对丰度显著升高。 　　（2）配对样本分析 　　（a）α和β多样性分析：胃癌组的胃黏膜和胃液菌群Shannon指数差异显著小于在胃炎组（P＜0.001）和肠化组中（P＜0.001）。基于Bray-curtis距离和weightedUniFrac距离的差值分析，胃癌阶段胃黏膜样本和胃液的距离均小于在胃炎阶段（P＜0.001）和肠化阶段（P＜0.05），而胃炎阶段和肠化阶段的胃黏膜和胃液样本的距离差值无显著差异。 　　（b）细菌差异分析：胃炎患者胃黏膜和胃液配对样本差异菌属共有103个，胃炎患者胃黏膜菌群中Helicobacter，Bacillus，Clostridium_sensu_stricto_1，Enterococcus，Lactococcus等菌属相对丰度显著高于胃液，而胃炎患者胃液中Rothia，Streptococcus，Neisseria，Fusobacterium，Peptostreptococcus等菌属相对丰度明显升高。肠化患者胃黏膜和胃液配对样本差异菌属共有53个，与肠化胃液菌群相比，肠化胃黏膜菌群中Lactobacillus，Geobacillus和Clostridium_sensu_stricto_1菌属相对丰度显著升高，而Neisseria，Prevotella，Fusobacterium，Rothia和Veillonella等菌属相对丰度显著降低。胃癌患者胃黏膜和胃液菌群比较共发现53个差异菌属，其中Lactococcus，Bacillus，Acinetobacter，Enterococcus，Geobacillus等菌属的相对丰度在胃癌胃黏膜中显著高于胃液，而Veillonella，Prevotella，Neisseria，Rothia和Fusobacterium等菌属相对丰度显著低于胃液。 　　4.胃癌发生过程中胃内pH及特定代谢物的变化 　　（1）胃癌发生不同阶段胃内pH值的变化：Hp阳性肠化组胃液pH显著高于Hp阴性肠化组胃液（P＜0.05），而在胃炎和胃癌组中，Hp阳性亚组的pH相比于Hp阴性亚组有升高趋势，但无统计学意义。Hp阴性胃癌组胃内pH显著高于Hp阴性胃炎组（P＜0.01）和Hp阴性肠化组（P＜0.05），Hp阳性胃癌组的pH相比于Hp阳性的胃炎和肠化组虽然呈升高的趋势，Hp阳性的胃炎、肠化和胃癌组三组的胃液pH无统计学差异。 　　（2）胃癌发生不同阶段胃内亚硝酸盐的变化：胃炎→肠化→胃癌这一过程中胃液亚硝酸盐含量呈逐渐递增的趋势，肠化胃液组的亚酸盐含量显著高于胃炎胃液组（P＜0.05），胃癌胃液组pH显著高于胃炎胃液组（P＜0.001）和肠化胃液组（P＜0.05）。在各个病变阶段中Hp感染对亚硝酸盐含量均无显著影响。Hp阳性胃癌胃液组亚硝酸盐含量显著高于Hp阳性胃炎组，Hp阴性胃癌胃液组亚硝酸盐含量也显著高于Hp阴性胃炎组。Hp阳性的肠化组相比于胃炎组（P=0.086），以及Hp阴性的肠化相比胃炎组（P=0.078）胃液中亚硝酸盐含量均呈上升的趋势，但无统计学意义。 　　（3）胃癌发生不同阶段胃内胆汁酸的变化：胃癌胃液组总胆汁酸含量显著高于胃炎胃液组（P＜0.05）。与肠化胃液组相比，胃癌胃液组总胆汁酸含量有增加的趋势（P=0.062）。Hp阴性胃癌胃液组总胆汁酸含量显著高于Hp阴性的胃炎（P＜0.01）和肠化（P＜0.01）胃液组。在胃炎和肠化阶段，Hp阴性和阳性的胃液中总胆汁酸含量无显著差异，而在胃癌阶段，我们发现Hp阳性胃癌胃液中总胆汁酸含量显著低于Hp阴性胃癌胃液组（P＜0.05），而Hp阳性胃癌胃液组总胆汁酸含量与Hp阳性的胃炎和肠化胃液组均无显著差异。 　　（4）胃癌发生不同阶段胃内短链脂肪酸的变化：胃癌组总短链脂肪酸（P＜0.01）、乙酸（P＜0.05）、丙酸（P=0.076）、丁酸（P＜0.05）、异丁酸（P=0.053）、戊酸（P＜0.01）、异戊酸（P=0.051）含量高于胃炎组，胃癌组中总短链脂肪酸（P＜0.01）、乙酸（P＜0.05）、丙酸（P=0.065）、丁酸（P＜0.05）等高于肠化组。而胃炎组和肠化组各种短链脂肪酸含量均无显著差异。Hp阳性胃癌胃液组总酸、乙酸、丙酸、丁酸、异戊酸含量显著高于Hp阳性的胃炎（allP＜0.05）和肠化（allP＜0.05）胃液组；Hp阳性胃癌胃液组异丁酸显著高于Hp阳性肠化胃液组（P＜0.05），Hp阴性胃癌胃液组戊酸含量显著高于Hp阴性胃炎胃液组。Hp阴性肠化胃液组的异丁酸含量显著高于Hp阳性肠化胃液组（P＜0.05）。Hp阴性肠化胃液组的总酸（P＜0.05）、乙酸（P＜0.05）和异丁酸（P＜0.05）含量要显著高于Hp阳性肠化胃液组。而在胃炎和胃癌阶段，Hp阳性和阴性进行比较胃液中各种短链脂肪酸均无显著差异。 　　（二）Hp感染及益生菌干预对INS-GAS小鼠胃肠道的影响 　　1.Hp感染和益生菌干预对INS-GAS小鼠胃黏膜病变的影响 　　Hp感染4月组小鼠胃黏膜组织可见明显的炎症细胞浸润，以及肠上皮化生等。而Hp感染合并益生菌处理组（4月组）小鼠胃黏膜组织的炎症明显减轻，胃黏膜病变也得到显著的改善。较对照组（7月组）小鼠，Hp感染7月组小鼠胃黏膜炎症细胞浸润明显增加，胃组织病理情况显著恶化。Hp感染组小鼠胃黏膜CD45表达明显高于对照组，而Hp感染合并益生菌处理组小鼠胃黏膜组织CD45表达明显低于Hp感染组。Hp感染4月组小鼠胃黏膜炎症（P＜0.01）、泌酸腺萎缩（P＜0.01）、化生（P＜0.01）和异型增生（P＜0.05）的评分显著高于对照组小鼠。与Hp感染4月组小鼠相比，Hp感染合并益生菌处理组小鼠胃黏膜炎症（P＜0.01）、泌酸腺萎缩（P＜0.05）、化生（P＜0.01）的评分显著下降，异型增生（P=0.06）的评分有下降趋势。益生菌处理组小鼠胃黏膜组织病理学评分与对照组小鼠均无显著差异。Hp感染小鼠胃内pH显著高于对照组小鼠，Hp感染小鼠接受益生菌干预后胃内pH显著降低。 　　2.Hp感染和益生菌干预对INS-GAS小鼠胃肠道菌群的影响 　　（1）α多样性分析：对照组、Hp感染组、益生菌处理组和Hp感染合并益生菌处理组的Chao指数无明显差异（P＞0.05）。对照组，Hp感染组和益生菌处理组三组间Shannon指数无显著差异（P＞0.05），而Hp感染合并益生菌处理组Shannon指数显著高于Hp感染组（P＜0.01）。 　　（2）β多样性分析：基于加权的UniFrac距离进行PCoA分析（PC1对菌群差异的解释度为40.76%，PC2对菌群差异的解释度为22.83%），对照组和Hp感染组样本间存在不同程度的混杂因素，无法有效区分开。益生菌处理组和Hp感染合并益生菌处理组样本相似性更高，无法有效的区分开。进行有监督的PLS-DA分析（Comp1对差异的解释权重比占16.18%，Comp2对差异的解释权重比占13.42%），对照组和Hp感染组样本有明显分离的趋势，而益生菌处理组和Hp感染合并益生菌处理组这两个组样本间无法有效区分开。 　　（3）物种组成和LEFSe分析：各组样本优势菌门主要包括Firmicutes，Bacteroidota，Proteobacteria和Actinobacteriota等。接受益生菌干预组（益生菌处理组，Hp感染合并益生菌处理组）厚壁菌门的平均相对丰度低于未接受益生菌干预组（对照组和Hp感染组）。而益生菌处理组和Hp感染合并益生菌处理组拟杆菌门的平均相对丰度高于对照组和Hp感染组。Hp感染组Campilobacterota菌门平均相对丰度明显高于对照组、益生菌处理组和Hp感染合并益生菌处理组。Hp感染组小鼠胃黏膜菌群中Hp相关的OTUreads数明显高于对照组（P＜0.05）和益生菌处理组（P＜0.05）；Hp感染合并益生菌处理组HpOTUreads显著高于对照组（P＜0.01）和益生菌处理组（P＜0.01），而Hp感染组HpOTUreads数与Hp感染合并益生菌组相比无显著差异（P＞0.05）。Hp感染合并益生菌处理小鼠胃内菌群中鼠李糖乳杆菌（P＜0.01）和唾液乳杆菌（P＜0.001）的相对丰度显著高于Hp感染组。益生菌处理组小鼠胃内菌群唾液乳杆菌相对丰度显著高于对照组（P＜0.05）。与对照组相比，Hp感染组小鼠胃内Helicobacter相对丰度显著升高，而Anaerocolumna，Anaerovorax，NK4A214，Ruminococcus，Sporomusa等多种菌属的相对丰度显著降低。通过对Hp感染组和Hp感染合并益生菌处理组胃内菌群属水平进行LEFSe分析发现，Hp感染合并益生菌处理组小鼠胃内菌群中Lachnospiraceae_NK4A136_group，Bacteroides，Lachnoclostridium，Parabacteroides，Roseburia等菌属相对丰度显著高于Hp感染组，而Lactobacillus，Streptococcus，Rodentibacter，Enterococcus和Lactococcus等菌属的相对丰度显著降低。 　　（4）PICRUSt2分析：较Hp感染组，Hp感染合并益生菌处理组中“Biosynthesisofothersecondarymetabolites”，“Aminoacidmetabolism”，“Metabolismofcofactorsandvitamins”，“Energymetabolism”，“Glycanbiosynthesisandmetabolism”等KEGG代谢通路显著富集，而“Nicleotidemetabolism”，“lipidmetabolism”，“Carbohydratemetabolism”，“Translation”，“Membranetransport”等KEGG代谢通路在Hp感染组显著富集。 　　3.Hp感染和益生菌干预对INS-GAS小鼠胃内基因转录水平和信号通路的影响 　　（1）差异基因分析：Hp感染组和对照组共有157个差异基因，在Hp感染组上调的基因有136个，下调的基因有21个。与Hp感染组相比，Hp感染的INS-GAS小鼠接受益生菌处理后共有380个基因发生显著变化，其中上调基因124个，下调基因256个。处理组，Hp感染合并益生菌处理组）厚壁菌门的平均相对丰度低于未接受益生菌干预组（对照组和Hp感染组）。而益生菌处理组和Hp感染合并益生菌处理组拟杆菌门的平均相对丰度高于对照组和Hp感染组。Hp感染组Campilobacterota菌门平均相对丰度明显高于对照组、益生菌处理组和Hp感染合并益生菌处理组。Hp感染组小鼠胃黏膜菌群中Hp相关的OTUreads数明显高于对照组（P＜0.05）和益生菌处理组（P＜0.05）；Hp感染合并益生菌处理组HpOTUreads显著高于对照组（P＜0.01）和益生菌处理组（P＜0.01），而Hp感染组HpOTUreads数与Hp感染合并益生菌组相比无显著差异（P＞0.05）。Hp感染合并益生菌处理小鼠胃内菌群中鼠李糖乳杆菌（P＜0.01）和唾液乳杆菌（P＜0.001）的相对丰度显著高于Hp感染组。益生菌处理组小鼠胃内菌群唾液乳杆菌相对丰度显著高于对照组（P＜0.05）。与对照组相比，Hp感染组小鼠胃内Helicobacter相对丰度显著升高，而Anaerocolumna，Anaerovorax，NK4A214，Ruminococcus，Sporomusa等多种菌属的相对丰度显著降低。通过对Hp感染组和Hp感染合并益生菌处理组胃内菌群属水平进行LEFSe分析发现，Hp感染合并益生菌处理组小鼠胃内菌群中Lachnospiraceae_NK4A136_group，Bacteroides，Lachnoclostridium，Parabacteroides，Roseburia等菌属相对丰度显著高于Hp感染组，而Lactobacillus，Streptococcus，Rodentibacter，Enterococcus和Lactococcus等菌属的相对丰度显著降低。 　　（4）PICRUSt2分析：较Hp感染组，Hp感染合并益生菌处理组中“Biosynthesisofothersecondarymetabolites”，“Aminoacidmetabolism”，“Metabolismofcofactorsandvitamins”，“Energymetabolism”，“Glycanbiosynthesisandmetabolism”等KEGG代谢通路显著富集，而“Nicleotidemetabolism”，“lipidmetabolism”，“Carbohydratemetabolism”，“Translation”，“Membranetransport”等KEGG代谢通路在Hp感染组显著富集。 　　3.Hp感染和益生菌干预对INS-GAS小鼠胃内基因转录水平和信号通路的影响 　　（1）差异基因分析：Hp感染组和对照组共有157个差异基因，在Hp感染组上调的基因有136个，下调的基因有21个。与Hp感染组相比，Hp感染的INS-GAS小鼠接受益生菌处理后共有380个基因发生显著变化，其中上调基因124个，下调基因256个。 　　（2）差异基因KEGG功能富集分析：对照组和Hp感染组的差异基因集显著富集在了“Toll-likereceptorsignalingpathway”，“PI3K-Aktsignalingpathway”，“NF-kappaBsignalingpathway”，“IL-17signalingpathway”，“Asthma”等多条KEGG通路。Hp感染组和Hp感染合并益生菌处理组的差异基因也富集在了多条炎症和免疫相关的KEGG通路，包括“Toll-likereceptorsignalingpathway”，“Th17celldifferentiation”，“TNFsignalingpathway”，“PI3K-Aktsignalingpathway”，“NOD-likereceptorsignalingpathway”，“NF-kappaBsignalingpathway”，“IL-17signalingpathway”等KEGG通路。 　　（3）GSEA分析：Hp感染引起“NF-κBsignalingpathway”，“Th17celldifferentiation”，“Toll-likereceptorsignalingpathway”和“TNFsignalingpathway”等促炎通路的基因上调。而Hp感染组接受益生菌处理后，“NF-κBsignalingpathway”，“Th17celldifferentiation”，“IL-17signalingpathway”和“TNFsignalingpathway”等促炎通路的基因下调。 　　（4）差异基因互作网络分析：对照组和Hp感染组的互作网络中，共52个节点，82条边，Tnf，Cxcl5，Il-17a，Cd14，Il1rn等基因可能在网络中起重要作用；Hp感染组和Hp感染合并益生菌处理组构建的蛋白互作网络中有151个节点，300条边。Tnf，Cd44，Cxcr4，Cxcl1，Cxcl13，Cxcl5等基因可能在网络中起重要作用。 　　（5）RT2ProfilerPCRArray分析：对照组和Hp感染组的炎症应答和自身免疫相关的差异基因有Il17a，Cd14，Tlr1，Ccl20，Ccr3，Il1rn，Cxcl3，Ifng，这些基因均在Hp感染后上调。而Hp感染后使用益生菌干预，多个基因表达下调，包括Cd14，Cxcl1，Cxcl2，Cxcl3，Il1a，Il1rn，Il17a，Ifng，Ccl20，而Tlr7和Cxcr1表达上调。有6个共有差异基因，这些基因在Hp感染组表达上调，而在Hp感染后接受益生菌干预表达均发生下调，降低至对照组水平。其中Il17a在Hp感染后倍数变化最大，其次是Cxcl3和Ifng，益生菌处理使其表达降低至正常水平。通过对样本和炎症应答和自身免疫相关基因表达进行聚类，发现对照组样本和Hp感染组样本距离较大，而Hp感染合并益生菌处理组样本聚类处于对照组和Hp感染组的中间。 　　（6）蛋白质印迹检测：Hp感染组小鼠胃黏膜TLR2和IL-17表达高于对照组，而Hp感染合并益生菌处理组小鼠胃黏膜TLR2和IL-17的表达低于Hp感染组。 　　（三）Hp感染、根除和根除后益生菌干预对胃肠道菌群的影响 　　1.无症状Hp感染者在Hp根除前后胃肠菌群的变化 　　（1）无症状Hp感染者在Hp根除前后胃内菌群的变化 　　（a）α多样性分析：Hp阳性志愿者接受Hp根除治疗后半年（Week_26），其胃内菌群α多样性指数（Sobs，Chao和Shannon指数）显著高于根除前（Week_0）（P＜0.001）和根除后1个月（Week_6）（P＜0.001）。 　　（b）β多样性分析：基于加权和非加权的UniFrac距离的PCoA分析，Week_0vsWeek_6和Week_0vsWeek_26显示出不同的分离效果。基于相似性的非参数统计分析（ANOSIM）结果显示：Week_0vsWeek6（unweightedUniFrac:P=0.015，weightedUniFrac:P=0.001），Week_0vsWeek26（unweightedUniFrac:P=0.001，weightedUniFrac:P=0.001）。Week_6vsWeek26（unweightedUniFrac:P=0.002，weightedUniFrac:P=0.001）。 　　（c）物种组成和差异分析：Hp感染者胃内菌群中Proteobacteria是最主要的菌门，几乎达到90%的丰度，接受Hp根除治疗后1个月，Proteobacteria的相对丰度急剧降低。其他相对丰度较高的菌门，如Firmicutes和Bacteroidetes在Week_6时间点相对丰度显著高于根除前。在根除后24周，Firmicutes和Bacteroidetes相对丰度依然显著高于根除后4周。Hp感染是导致患者胃内菌群中Proteobacteria占大多数的主要原因，根除Hp后，Hp感染者胃内菌群中Hp的相对丰度从70%下降至0%。接受Hp根除治疗后，除了Hp相对丰度下降，其他菌属包括Lactobacillus，Prevotella_9，和Bifidobacterium的相对丰度显著升高，这种差异在Week_26vsWeek_0中最为明显。根除后24周与根除后4周相比，志愿者胃内菌群中Prevotella_9，Bacteroides和Lactobacillus显著升高，而Streptococcus，Haemophilus和Neisseria菌属相对丰度显著降低。 　　（d）PICRUSt1分析：Hp根除后，多种疾病相关的KEGG代谢通路发生显著变化，如“Lipopolysaccharidebiosynthesis”，“Lipopolysaccharidebiosynthesisproteins”，“Bacterialmotilityproteins”和“Bacterialchemotaxis”等KEGG通路在Hp感染组中更为富集。与之相反，相比于根除前，多种生理相关的通路，包括“Glycolysis/gluconeogenesis”，“Glycine，serine，andthreoninemetabolism”和“Pentosephosphatepathway”等KEGG通路在Week_6和Week_26时间点得到恢复。 　　（2）无症状Hp感染者在Hp根除前后肠道菌群的变化 　　（a）α多样性分析：Hp阳性组肠道菌群α多样性指数（Sobs和Chao指数）显著高于健康对照组（P＜0.05）。与根除前相比，根除后1个月和根除后半年志愿者肠道菌群α多样性指数（Sobs和Chao指数）呈下降趋势，但无明显的统计学差异。 　　（b）β多样性分析：Hp感染者肠道菌群结构与Hp阴性的健康对照者具有显著的差异（ANOSIM，P=0.01）。志愿者接受Hp根除治疗后，Week_6与Week_26时间点志愿者肠道菌群的β多样性与健康对照者无显著差异。给予非加权的UniFrac距离的PCoA分析显示：Hp感染者与Hp阴性健康对照肠道菌群明显分离，然而在Week_6和Week_26时间点，Hp根除后肠道菌群与根除前肠道菌群逐渐分离，而与健康对照者的肠道菌群结构更为接近（ANOSIM，Week_0vsControl:P=0.01，Week_6vsControl:P＞0.05，Week_26vsControl:P＞0.05）。 　　（c）物种组成和差异分析：在门水平，Hp阳性者肠道菌群中，Proteobacteria，Actinobacteria和Acidobacteria菌门相对丰度显著高于健康对照组。与根除前和根除后4周相比，Hp根除后24周志愿者肠道菌群中Firmicutes相对丰度显著增加，而Bacteroidetes和Proteobacteria的相对丰度显著降低。然而，根除后4周和根除前的菌群在门水平无显著差异。在属水平，Hp感染组Subdoligranulum和Lachnoclostridium菌属相对丰度与健康对照组相比显著降低，然而Alistipes菌属的相对丰度显著升高。与根除前相比，根除治疗后半年菌属的紊乱部分得到恢复，Lachnoclostridium和Blautia菌属相对丰度显著升高，Alistipes相对丰度显著下降。与根除后1个月相比，根除后24周肠道菌群中一些具有潜在益生功能的菌属显著增多，如Blautia和Eubacteriumhallii。 　　（d）PICRUSt1分析：相比于健康对照者，Hp阳性组中一些功能通路，如“Metabolismofotheraminoacids”，“Transportandcatabolism”，“Signalingmoleculesandinteraction”和“Neurodegenerativediseases”等KEGG通路显著富集。根处前后，菌群功能预测分析显示，与Hp根除后24周相比，“Infectiousdiseases”，“Metabolicdiseases”，“Transportandcatabolism”，“Signalingmoleculesandinteraction”等KEGG代谢通路在Hp感染组中显著富集。 　　2.Hp感染、根除和益生菌干预对C57BL/6小鼠胃肠道菌群的影响 　　（1）Hp感染、根除和根除后益生菌干预对C57BL/6小鼠胃内菌群的影响 　　（a）α多样性分析：Hp感染组小鼠（G0_Hp）胃内菌群的丰富度指数Chao指数显著低于对照组小鼠（G0_Con）（P＜0.05），Shannon指数无显著差异。Hp根除后0d时间点，相比于G0_Hp组小鼠，Hp根除组（G0_Hp_E）小鼠胃内菌群Shannon指数（P＜0.05）显著下降。在根除后0d的Hp根除组（G0_Hp_E）小鼠和根除后4周时间点的Hp根除组（G1_Hp_E）小鼠胃内菌群α多样性指数（Chao和Shannon指数）均无显著差异。根除后4周，Hp根除后益生菌灌胃处理4周的小鼠组（G1_Hp_E_P）与G1_Hp_E组小鼠胃内菌群α多样性指数（Chao和Shannon指数）均无显著差异。G1_Hp_E组小鼠胃内菌群丰富度指数Chao指数（P＜0.01）显著低于G0_Con组，而Shannon指数无明显差异。 　　（b）β多样性分析：基于binaryjaccard距离和Bray-curtis距离对样本进行非度量多维尺度分析（NMDS），应力值（Stress）分别为0.131和0.15。G0_Con组和G0_Hp组小鼠的胃内菌群结构具有显著差异（Bray-curtis：AdonisP=0.003），G0_Hp_E组与G0_Hp组小鼠胃内菌群结构具有显著差异（Bray-curtis：AdonisP=0.004），G0_Hp_E组和G1_Hp_E组小鼠胃内菌群结构具有显著差异（Bray-curtis：AdonisP=0.036），G1_Hp_E_P组与G1_Hp_E组小鼠胃内菌群结构具有显著差异（Binary-jaccard：AdonisP=0.001）。G1_Hp_E组和G1_Hp_E_P组小鼠胃内菌群结构较G0_Hp_E组小鼠更为接近G0_Con小鼠胃内菌群结构。 　　（c）物种组成和差异分析：小鼠胃内菌群主要由变形菌门、厚壁菌门、拟杆菌门、放线菌门、疣微菌门组成。Hp根除后小鼠胃内菌群中变形菌门相对丰度升高，厚壁菌门相对丰度降低。我们通过LEFSe分析方法去鉴别各组别在属水平的差异细菌，结果表明：与对照组相比，Hp感染组（G0_Hp）中Clostridium_sensu_stricto_1，Ralstonia，Strpteococcus，Citrobacter，Lactococcus的相对丰度显著升高。Hp根除后0d组中Clostridium_sensu_stricto_1，Dubosiella，Strpteococcus，Butyricoccus和Enterococcus等菌属相对丰度显著低于Hp感染组（G0_Hp）。Hp根除后1个月（G1_Hp_E）组小鼠胃内菌群中Turicibacter，Rhodococcus，Lachnoclostridium和Butyricicoccus菌属相对丰度显著高于Hp根除结束后0d小鼠组（G0_Hp_E），而Faecalibaculum，Strpteococcus和Erysipelatoclostridium等菌属相对丰度显著降低。Hp根除后益生菌处理4周小鼠组（G1_Hp_E_P）较G1_Hp_E组，Lactobacillus、Bacteroides和Erysipelactoclostridium菌属相对丰度显著升高，而Turicibacter，Rhodococcus，Akkermansia，Clostridium_sensu_stricto_1等菌属相对丰度显著降低。 　　（d）PICRUSt1分析：Hp感染组与对照组相比，多条KEGG通路显著富集，包括“CarbohydrateMetabolism”，“GeneticInformationProcessing”，“Transcription”，“ReplicationandRepair”等通路，而“Metabolism”，“MetabolismofOtherAminoAcids”，“CellularProcessesandSignaling”，“MetabolismofTerpenoidsandpolyketides”和“Aminoacidmetabolism”等KEGG通路在对照组中显著富集。而在Hp感染组和Hp根除后0d组的比较中，我们发现“Cancers”，“SignalingMoleculesandInteraction”和“CardiovascularDiseases”等通路在Hp根除后0d组显著富集。在根除后1月组中“EnzymeFamilies”，“GeneticInformationProcessing”，“GlycanBiosynthesisandMetabolism”，“Folding，SortingandDegradation”等KEGG通路的丰度显著低于Hp根除后0d组，而“EndocrineSystem”显著富集。Hp根除后合并益生菌处理组中“GeneticInformationProcessing”通路丰度显著高于Hp根除后1月组，而“CarbohydrateMetabolism”通路丰度显著降低。 　　（2）Hp感染、根除和根除后益生菌干预对C57BL/6小鼠肠道菌群的影响 　　（a）α多样性分析：Hp感染组小鼠（F0_Hp）肠道菌群α多样性指数（Chao和Shannon指数）与对照组小鼠粪便（F0_Con）菌群无显著差异。Hp根除后0d小鼠组（F0_Hp_E）肠道菌群Chao指数（P＜0.001）和Shannon指数（P＜0.001）显著低于F0_Hp。Hp根除后1个月小鼠组（F1_Hp_E）肠道菌群的Chao指数（P＜0.001）和Shannon指数（P＜0.001）显著高于F0_Hp_E组。Hp根除后给予益生菌连续灌胃4周处理组小鼠（F1_Hp_E_P）肠道菌群的丰富度指数Chao指数（P＜0.001）显著高于F1_Hp_E组，而Shannon指数两组间无显著差异。F1_Hp_E组和F1_Hp_E_P组菌群丰富度指数未恢复至对照组小鼠（F0_Con）水平，Chao指数（P＜0.001）显著低于对照组小鼠，然而，Shannon指数和F0_Con组无显著差异。 　　（b）β多样性分析：基于加权和非加权UniFrac距离的NMDS分析显示：F0_Hp组和F0_Con组小鼠肠道菌群较为接近（ANOSIM，unweightedUniFrac:P=0.034，weightedUniFrac:P=0.138）；Hp根除使小鼠肠道菌群结构发生显著变化，Hp根除后1月组小鼠肠道菌群与Hp根除后0d组菌群明显分离（ANOSIM，unweightedUniFracP=0.001），Hp根除后添加益生菌处理（F1_Hp_E_P）与F1_Hp_E组小鼠肠道菌群具有明显差异（ANOSIM，unweightedUniFracP=0.001），有更接近F0_Con组肠道菌群结构的趋势。 　　（c）物种组成和差异分析：对照组和Hp感染组小鼠肠道菌群主要由拟杆菌门、厚壁菌门和疣微菌门组成，而Hp根除后0d组小鼠优势菌门主要有厚壁菌门，疣微菌门和变形菌门，该组拟杆菌门平均相对丰度下降几乎至0%，厚壁菌门，疣微菌门和变形菌门平均相对丰度均明显上升。接受根除药物治疗后一个月，Hp根除后1月组的优势菌门主要有厚壁菌门和疣微菌门，厚壁菌门的平均丰度较Hp根除后0d组明显升高，而变形菌门的平均相对丰度明显降低。在Hp根除后给予小鼠益生菌干预1个月，我们发现Hp根除后合并益生菌处理组的优势菌门为厚壁菌门和拟杆菌门，拟杆菌门的相对丰度较未给予益生菌干预处理的Hp根除后1月组明显升高。Hp感染组肠道菌群中Bifidobacterium和Acinetobacter相对丰度显著高于对照组，而Faecalibaculum，Monoglobus和Enterorhabdus等菌属相对丰度显著减少；Hp根除使得多种属水平细菌发生显著变化，Hp根除后0d组（F0_Hp_E）小鼠肠道菌群中Bilophila，Alistipes，Desulfovibrio，Streptococcus，Ruminococcus等菌属较Hp感染组显著降低，而Akkermansia，Escherichia_Shigella，Citrobacter，Klebsiella，Roseburia等菌属显著上升，随着时间推移，Hp根除后1月组（F1_Hp_E）Escherichia_Shigella，Citrobacte，Klebsiella，Enterococcus和Lactobacillus等菌属显著减少，Lachnospiraceae_NK4A136_group，Lachnoclostridium和Butyricicoccus显著升高，添加益生菌（F1_Hp_E_P），使Bacteroides，Lactobacillus，Lachnospiraceae_UCG_001，Erysipelatoclostridium显著增多，而Lachnospiraceae_NK4A136_group，Akkermansia，Blautia，Ruminococcus，Escherichia_Shigella等菌属显著减少。 　　（d）PICRUSt1分析：在Hp感染组和Hp根除后0d组的比较中，“MetabolicDiseases”，“EnergyMetabolism”，“MetabolismofCofactorsandVitamins”，“NucletideMetabolism”，“GlycanBiosynthesisandMetabolism”等KEGG通路在Hp感染组（F0_Hp）中显著富集，而“SignalTransduction”，“Transcription”，“MembraneTransport”，“CellularProcessesandSignaling”，“CarbohydrateMetabolism”等KEGG通路在Hp根除后0d组（F0_Hp_E）显著富集。而Hp根除1个月后，F1_Hp_E组中“CellMotility”，“NecleotideMetabolism”，“Translation”，“ReplicationandRepair”，“Transcription”等通路丰度显著高于Hp根除后0d组（F0_Hp_E），而“InfectiousDiseases”，“SignalTransduction”，“CellularProcessesandSignaling”，“Metabolism”和“GeneticInformationProcessing”等通路显著低于F0_Hp_E组。与根除后1月组相比较，Hp根除后合并益生菌处理组中“EnergyMetabolism”，“NucleotideMetabolism”，“ReplicationandRepair”，“AminoAcidMetabolism”，“CarbohydrateMetabolism”等通路显著富集，而“MembraneTransport”，“Transcription”，“SignalTransduction”，“Cellmotility”等KEGG通路在F1_Hp_E组中显著富集。 　　3.Hp感染、根除和根除后益生菌干预对C57BL/6小鼠肠道短链脂肪酸含量和肠屏障功能的影响 　　（1）对短链脂肪酸含量的影响：在根除后0d时间点，Hp感染组（F0_Hp）与对照组小鼠（F0_Con）相比，粪便中总的短链脂肪酸含量、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸均无明显差异；相比于F0_Con组，F0_Hp组小鼠粪便中异丁酸含量显著升高（P＜0.01），而异戊酸含量显著降低（P＜0.05）。Hp根除组（F0_Hp_E）小鼠粪便中总短链脂肪酸含量（P＜0.01）、乙酸（P＜0.05）、丙酸（P＜0.001）、丁酸（P＜0.01）显著低于Hp感染组，而异戊酸含量（P＜0.01）显著高于Hp根除组，两组异丁酸含量和戊酸含量无显著差异。F0_Hp_E组小鼠粪便中总短链脂肪酸（P＜0.01）、乙酸（P＜0.01）、丙酸（P＜0.05）、异戊酸（P=0.05）含量低于F0_Con组，而异丁酸含量（P＜0.05）显著高于F0_Con组，两组间丁酸和戊酸含量无显著差异。在根除后1月时间点，对照组（F1_Con）和感染组（F1_Hp）小鼠粪便中总短链脂肪酸、乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸、异戊酸含量均无显著差异。与Hp感染组相比，Hp根除组（F1_Hp_E）小鼠粪便中丙酸（P＜0.001）和戊酸（P＜0.05）含量显著下降，而两组间总短链脂肪酸含量、乙酸、丁酸、异丁酸、异戊酸含量无显著差异。F1_Hp_E组和Hp根除合并益生菌处理组（F1_Hp_E_P）两组间小鼠粪便的总短链脂肪酸、乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸、异戊酸含量均无显著差异。 　　（2）对肠道紧密连接蛋白的影响：Hp感染后结肠Occuludin有表达增加的趋势，Claudin1表达无明显影响，而Hp根除治疗后0天结肠Occuludin和Claudin1蛋白下降趋势不明显。Hp根除后1个月时，小鼠结肠屏障功能持续被破坏，Hp根除后1月组Occuludin和Claudin1的表达较根除后0天明显降低，然后Hp根除后合并益生菌处理组小鼠结肠Occuludin和Claudin1的表达均明显高于Hp根除1月组，然而仍低于根除后0d组。 　　结论： 　　1.在胃癌发生过程中存在胃内微环境失衡，包括pH升高，胃黏膜和胃液菌群紊乱，及其代谢产物异常改变。胃黏膜和胃液菌群结构具有显著差异，但随着胃黏膜病变的进展，两者差异逐渐缩小。 　　2.益生菌减轻Hp感染介导的胃黏膜病变，可能通过调节菌群，抑制炎症和调控炎症免疫相关信号通路。 　　3.益生菌可以调节Hp根除治疗后的胃肠道菌群失衡，促进肠屏障功能的恢复。