检索历史 清除

摘要目的：<br>　　探究PI3K抑制剂BYL-719对破骨细胞形成及其功能的影响和相应机制，并初步研究其对去卵巢小鼠介导的骨质疏松症治疗作用。<br>　　方法：<br>　　1.明确表象：研究BYL-719对破骨细胞形成的影响。在细胞因子M-CSF(巨噬细胞集落刺激因子)和RANKL（核因子-κB受体活化因子配体）的诱导下，破骨细胞前体细胞BMMs（骨髓来源单核细胞）向破骨细胞分化的过程中，在无细胞毒性的浓度下，不同浓度的BYL-719对破骨细胞形成的影响：a.利用CCK-8方法确定BYL-719的安全浓度；b.研究不同浓度的BYL-719对破骨细胞形成的影响。<br>　　2.证实功效：研究BYL-719对破骨细胞骨吸收功能的影响。在明确BYL-719对破骨细胞形成的影响后，此部分研究将利用免疫荧光染色和电镜扫描技术观察BYL-719对破骨细胞褶皱边缘(F-肌动蛋白环）以及破骨细胞骨吸收陷窝形成的影响。<br>　　3.阐明机制：研究BYL-719抑制破骨细胞形成和骨吸收功能的分子机制。本部分研究将利用WesternBlot、qPCR技术，从蛋白和基因两个方面探讨BYL-719抑制破骨细胞形成和骨吸收的分子机制。<br>　　4.探索应用：研究BYL-719在体内对去卵巢（OVX）小鼠骨质疏松症的治疗作用。我们将28只8周龄雌性小鼠随机分为4组，其中三组麻醉后切除卵巢，另外一组只切除卵巢旁脂肪组织：卵巢切除4周后，假手术组和对照组腹腔注射生理盐水，低剂量组腹腔注射5mg/kg的BYL-719，高剂量组腹腔注射10mg/kg的BYL-719。给予不同处理后的第4周处死小鼠，获取胫骨、股骨标本，利用Micro-CT、Hamp;E染色和TRAP染色方法以明确BYL-719对去卵巢小鼠的骨保护效应。<br>　　结果：<br>　　1.表象：a.BYL-719在25μM及以上浓度时，对BMMs产生细胞毒性；b.BYL-719以浓度依赖性抑制破骨细胞形成。<br>　　2.功效：随着BYL-719浓度的增加，破骨细胞的功能逐渐减弱，表现为肌动蛋白环和骨吸收陷窝的减少。<br>　　3.相关机制：a.BYL-719通过抑制PI3K/AKT、NF-κB和MAPK信号通路来抑制破骨细胞的形成。b.BYL-719抑制破骨细胞特异性基因的表达，并呈浓度依赖性。<br>　　4.应用结果：BYL-719可以预防去卵巢小鼠导致的骨丢失。单纯OVX对照组小鼠骨丢失明显，BYL-719治疗后骨丢失明显减少，高剂量组更为明显。<br>　　结论：<br>　　BYL-719通过抑制PI3K/AKT、NF-κB和MAPK途径抑制RANKL诱导的破骨细胞形成和小鼠卵巢切除导致的骨丢失。