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摘要背景：<br>　　肝癌已成为世界范围内癌症相关死亡的第四大常见病因，是发病率和致死率最高的恶性肿瘤之一，全球每年新增肝癌病例约90万，同时每年约有83万人因肝癌死亡。目前，我国的肝癌防治形势尤其严峻，现阶段我国肝癌患者占全球的50％以上，同时我国肝癌患者的5年生存率仅为12％，远低于世界平均水平。因此，研究肝癌的发生发展机制，鉴定新的肝癌诊断标志物和寻找潜在的治疗靶点，有助于提高肝癌的诊断和治疗水平，具有重要的科学意义和社会价值。<br>　　Hedgehog（Hh）信号通路是调控机体发育的重要信号传导通路，其在生物体胚胎发育、器官形成及肿瘤发生过程中均扮演着至关重要的角色。转录因子Gli是通路上的关键转录调控因子，其介导了Hh信号从细胞质向细胞核中的转导。蛋白翻译后修饰对Gli蛋白的活化、降解和胞质转运至关重要，一旦修饰紊乱将会导致Hh信号异常活化，这常常与多种肿瘤（其中包括肝癌）的发生发展密切相关，但其详细的分子机制仍有待进一步研究。<br>　　hnRNPA3作为hnRNPs的家族成员之一，参与许多RNA和蛋白转运过程，但其对蛋白质稳定性的调控作用尚未有报道。前期生物信息学分析结果显示肝癌组织中hnRNPA3的表达水平显著上调，临床组织结果也表明hnRNPA3的蛋白水平在肿瘤组织中表达明显高于正常组织。通过文献调研我们又发现hnRNPA3能够调控转录因子Gli的活性，后续实验也证实hnRNPA3能够和转录因子Gli2发生相互作用。因此，深入研究hnRNPA3在Hh信号转导中的调控机制，以及探讨hnRNPA3是否可能通过介导Hedgehog信号通路中的Gli2蛋白稳定性进而影响肝癌细胞恶性增殖十分重要，这也将为肝癌的诊断和治疗提供新思路、新策略。<br>　　研究目的：<br>　　1、验证hnRNPA3调控Hedgehog信号通路。<br>　　2、探讨hnRNPA3在肝癌细胞增殖过程中的生物学作用。<br>　　3、研究hnRNPA3与转录因子Gli2的相互作用。<br>　　4、探索hnRNPA3调控转录因子Gli2蛋白稳定性的详细分子机制。<br>　　5、研究hnRNPA3在肝癌组织中的表达情况及与其病理特征的相关性。<br>　　研究方法：<br>　　1、通过干扰/过表达质粒hnRNPA3，采用Luciferasereporterassay、Real-timePCR、Westernblot等技术检测Hh信号通路报告基因8×GBS-Luc活性及其转录调节因子Gli2的mRNA表达水平和蛋白表达水平。<br>　　2、选取肝癌细胞系Huh7、Hep3B、HepG2、SK-hep-1为研究对象，首先运用Westernblot检测hnRNPA3在这四种肝癌细胞系中的表达情况。然后，利用慢病毒感染系统，在hnRNPA3相对低表达的Huh7和高表达的HepG2细胞中分别过表达或敲减hnRNPA3，构建稳定肝癌细胞系，再通过生长曲线和EdU实验分别评估hnRNPA3对肝癌细胞增殖的影响。<br>　　3、通过Co-IP、免疫荧光等实验，确定hnRNPA3和转录因子Gli2之间的相互作用，利用蛋白降解实验等方法探索hnRNPA3调控Gli2蛋白水平和蛋白降解速率的具体分子机制。<br>　　4、在临床样本基础上，采用免疫组织化学和Westernblot检测hnRNPA3在肝癌组织中的表达情况，并收集公共数据库中的肝癌临床样本数据，通过生物信息学分析hnRNPA3与肝癌的关系及与其病理特征的相关性。<br>　　研究结果：<br>　　1、在Huh7/HepG2细胞中，过表达/干扰hnRNPA3，Hedgehog信号通路报告基因8×GBS-Luc活性相应地升高/降低；过表达hnRNPA3，能够显著提高Gli2的蛋白表达水平，但对Gli1和Gli3几乎无影响。<br>　　2、hnRNPA3的高表达促进肝癌细胞的增殖，相反地，干扰hnRNPA3抑制了肝癌细胞的增殖。<br>　　3、hnRNPA3能与转录因子Gli2发生相互作用，并通过抑制Gli2的蛋白酶体降解途径稳定Gli2的蛋白表达水平。<br>　　4、hnRNPA3在肝癌组织中的表达高于其相对应的正常组织。生物信息学分析结果也显示，肝癌样本中hnRNPA3的转录水平明显高于其相对应的正常肝组织，并且hnRNPA3与肝癌患者病理特征的相关性较高，hnRNPA3表达水平高的患者，其预后也更差。<br>　　研究结论：<br>　　1、hnRNPA3激活Hedgehog信号通路，启动Hh信号通路下游靶基因的表达。<br>　　2、hnRNPA3促进肝癌细胞的恶性增殖。<br>　　3、hnRNPA3与Hh通路中核心转录因子Gli2发生相互作用，并增强Gli2的蛋白稳定性，进而调控Hh信号通路。<br>　　4、hnRNPA3在肝癌组织中异常高表达，且高表达hnRNPA3的患者，肿瘤的病理分级、分期越高，其预后也更差。