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摘要目的：以中医肝藏象理论为指导，以动物模型为载体，探讨GABA能系统与HPA轴失调在肝疏泄太过典型病证PMDD肝气逆证发病中的作用，评估平肝新药丹皮酚对其的治疗作用，并评价相关药效药理机制。<br>　　方法：1.用阴道电阻值测量法联合居住入侵法制备自然筛选PMDD肝气逆证大鼠模型，采用地塞米松抑制实验对PMDD肝气逆证模型大鼠下丘脑-垂体-肾上腺（Hypothalamuspituitaryadrenal,HPA）轴状态进行检测，采用Elisa法检测各组大鼠血浆内CORT水平、血清、下丘脑、海马内ACTH、CRH水平，验证PMDD肝气逆证模型大鼠是否存在HPA轴失调。<br>　　2.用激素诱导联合居住入侵法制备激素诱导PMDD肝气逆证大鼠模型，以丹皮酚为中药组、以氟西汀为阳性药对照组，进行给药干预，采用PCR芯片实验初步探索PMDD肝气逆证模型大鼠海马脑区GABAamp;Glutamate和HPA-cAMP/PKA通路在mRNA水平是否存在GABA能系统和HPA轴失调，筛选PMDD肝气逆证大鼠模型差异表达基因。<br>　　3.用阴道电阻值测量法联合居住入侵法制备自然筛选PMDD肝气逆证大鼠模型，用丹皮酚给药干预，进行居住入侵、高架十字迷宫、Y迷宫实验等行为学实验；采用Elisa法检测各组大鼠血浆内CORT水平、血清内ACTH、CRH水平；采用LC-MS法检测各组大鼠血清内NE、5-HT等神经递质含量；采用HE染色法检测各组大鼠海马脑区神经元损伤情况；采用WersternBlot法检测各组大鼠海马脑区GRM5、ABAT、GABBR2、GRIK5等蛋白表达水平，明确海马脑区GABA能系统和HPA轴失调与PMDD肝气逆证发生相关性及丹皮酚发挥疗效的部分药效药理机制。<br>　　结果：1.使用阴道电阻值测量联合居住入侵法制备自然筛选PMDD肝气逆证大鼠模型，造模结束后，模型组大鼠及模型+地塞米松组大鼠居住入侵攻击行为得分显著高于对照组大鼠（**plt;0.01），证明PMDD肝气逆证模型大鼠造模成功。地塞米松抑制实验结束后，与对照组相比，模型组与模型+地塞米松组大鼠血浆CORT含量均显著性升高（*plt;0.05）；与对照组相比，模型组大鼠血清、下丘脑和海马ACTH检测含量显著性降低（**plt;0.01，**plt;0.01，**plt;0.01）；各组大鼠血清内CRH含量无显著性差异（pgt;0.05）。<br>　　2.使用激素诱导联合居住入侵法制备激素诱导PMDD肝气逆证大鼠模型，制备出周期统一且规律的大鼠模型，再使用高通量PCR芯片实验检测大鼠海马脑区GABAamp;Glutamate和HPA-cAMP/PKA通路差异表达基因，结果表明与PMDD肝气逆证海马脑区GABA能系统及HPA轴失调的发病机制存在关联的基因有ABAT、GABBR2、GABRB3、GRIA3、GRIK5、GRM5、GRIA1、ADORA1、GRK3、ADRB2等，与对照组相比，模型组大鼠海马脑区相关差异基因表达水平显著性升高（**plt;0.01，***plt;0.001），与对照组相比，丹皮酚给药干预组大鼠海马脑区以上基因表达水平无显著性差异（pgt;0.05）。<br>　　3.丹皮酚对阴道电阻值测量联合居住入侵法制备的自然筛选PMDD肝气逆证大鼠模型行为学影响<br>　　3.1居住入侵测试结果：给药前大鼠于非接受期间期1期及接受期分别进行居住入侵后，在攻击打斗得分的比较中，与对照组相比，模型组、氟西汀组、丹皮酚组均显著性升高（**plt;0.01，**plt;0.01，**plt;0.01）。给药两个周期后，再次于大鼠非接受期间期1期及接受期分别进行居住入侵，在攻击打斗得分的比较中，与模型组相比，氟西汀组、丹皮酚组均显著性降低（**plt;0.01，**plt;0.01）。<br>　　3.2高架十字迷宫结果：在给药前后大鼠动情周期接受期开放臂进入次数百分比（OE%）、开放臂停留时间百分比（OT%）的比较中，各组大鼠间对比均无显著性差异（pgt;0.05）。与对照组相比，模型组、氟西汀组、丹皮酚组给药前大鼠动情周期非接受期OE%均显著性降低（*plt;0.05，*plt;0.05，**plt;0.01）。与对照组相比，模型组、氟西汀组、丹皮酚组给药前大鼠动情周期非接受期OT%均显著性降低（**plt;0.01，**plt;0.01，**plt;0.01）。与模型组相比，氟西汀组、丹皮酚组给药后大鼠动情周期非接受期OE%均显著性升高（**plt;0.01，**plt;0.01）。在给药后大鼠动情周期非接受期OT%的比较中，各组大鼠间对比没有显著性差异（pgt;0.05）。<br>　　3.3Y迷宫结果：在给药前后大鼠接受期、非接受期Y迷宫交替率的比较中，各组间均无显著性差异（pgt;0.05）。<br>　　4.丹皮酚对阴道电阻值测量联合居住入侵法制备的自然筛选PMDD肝气逆证大鼠模型微观指标影响：<br>　　4.1Elisa实验结果：给药后，与模型组相比，氟西汀组、丹皮酚组大鼠血浆CORT含量均显著性降低（*plt;0.05，***plt;0.001）。与模型组相比，氟西汀组、丹皮酚组大鼠血清ACTH含量均显著性升高（*plt;0.05，**plt;0.01）。在各组大鼠血清CRH含量的检测中，各组大鼠间对比不存在显著性差异（pgt;0.05）。<br>　　4.2血清神经递质检测结果：与模型组相比，氟西汀组大鼠血清组胺（Histamine，HisA）含量显著性降低（*plt;0.05），与氟西汀组相比，对照组、丹皮酚组大鼠血清组胺（HisA）含量显著性升高（*plt;0.05，*plt;0.05）。与模型组相比，氟西汀组和丹皮酚组大鼠血清组氨酸（Histidine，His）含量显著性升高（**plt;0.01，**plt;0.01）。与模型组相比，丹皮酚组大鼠血清去甲肾上腺素（Norepinephrine，NE）含量显著性降低（***plt;0.001）。与模型组相比，氟西汀组大鼠血清五羟色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）含量显著性升高（*plt;0.05）；<br>　　4.3HE染色实验结果：模型组大鼠海马CA3区、齿状回神经元呈嗜酸性变性、胞浆深染，部分细胞核膜和细胞膜断裂，出现胞浆空泡及固缩现象，部分细胞核仁消失、苔状纤维-CA3的突触减少，突起断裂，星形胶质细胞水肿，空泡化，齿状回颗粒细胞再生减少，海马构筑紊乱；用丹皮酚干预后部分神经元及颗粒细胞得到恢复，但无统计学意义。<br>　　4.4WersternBlot实验结果：与模型组相比，丹皮酚组大鼠海马脑区GRM5蛋白表达均显著性升高（*plt;0.05）。与模型组相比，丹皮酚组大鼠海马脑区GABRB3、GABBR2、CRHR1、CRHR2蛋白表达有降低趋势，但未见显著性差异（pgt;0.05）。各组大鼠海马脑区ABAT蛋白表达无显著性差异（pgt;0.05）。与模型组相比，丹皮酚组、氟西汀组大鼠海马脑区ADRB2蛋白表达显著性降低（*plt;0.05，*plt;0.05）。<br>　　结论：1.地塞米松抑制实验结果显示，与对照组相比，模型组大鼠居住入侵攻击行为得分的显著性升高以及微观指标CORT、ACTH水平的异常，证实PMDD肝气逆证模型大鼠确实存在HPA轴失调。<br>　　2.行为学实验数据表明，PMDD肝气逆证模型大鼠存在易激惹、焦虑、易产生攻击行为的情绪状态，与临床PMDD肝气逆证患者的精神症状较为相似，但并未在动物模型中检测出学习记忆能力下降的症状。<br>　　3.通过PCR芯片实验、Elisa等一系列检测，证明PMDD肝气逆证模型大鼠确实存在海马脑区GABA能系统及HPA轴失调，丹皮酚可能通过调节GRM5、GABRB3、GABBR2、CRHR1、CRHR2、ABAT、ADRB2等基因在海马脑区的表达、改变神经递质NE、5-HT、His、CORT、ACTH等含量变化，纠正PMDD肝气逆证模型大鼠存在海马脑区GABA能系统及HPA轴失调现象。<br>　　综上所述，海马脑区GABA能系统及HPA轴失调可能与PMDD肝气逆证发病密切相关，丹皮酚可通过调节GABA能系统及HPA轴功能发挥干预作用，以上研究可为PMDD肝气逆证发病机制、临床诊断和治疗靶点研究提供参考和方向。