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摘要众所周知，炭疽这一烈性传染病的传染性极强且致死率高，是一种人畜共患病。炭疽主要通过胃肠、皮肤和吸入三种途径感染，其中皮肤和吸入是主要的感染途径，死亡率分别为20%和100%，现有炭疽疫苗以重组蛋白rPA为抗原，其免疫原性弱，需要添加佐剂增强免疫应答，尽管铝盐佐剂能够诱导较好的体液免疫应答，但其存在严重的局部副反应，而且细胞免疫弱，因此，需要研发新型、安全且有效的佐剂。生物可降解的聚合物纳米粒具有可生物降解、能够携载大量抗原并诱导高水平的免疫应答的优势，是具有潜力的疫苗佐剂。纳米颗粒可以通过不同方式携载抗原，如通过静电相互作用吸附抗原、通过化学偶联方式携载抗原等，但不同抗原携载方式对免疫有什么影响，目前还是未知，因此，本论文将以rPA为模式抗原，采用不同方式在纳米粒表面展示抗原，研究不同抗原展示方式对免疫效应的影响，具体研究内容包括以下几个方面：<br>　　（1）不同抗原展示方式的PLGA脂质复合纳米疫苗的构建。以PLGA和DDAB为材料，采用纳米沉淀法制备了载免疫刺激剂R848的阳离子脂质纳米粒R848/PLGA/DDAB，以PLGA和DSPE-PEG2000-SH为材料，采用纳米沉淀法制备了载免疫刺激剂、且表面含巯基的纳米粒R848/PLGA/SH。采用不同方式在构建的两种纳米粒表面携载和展示抗原，其中，纳米粒R848/PLGA/DDAB以静电相互作用方式在其表面物理吸附和携载抗原rPA，纳米粒R848/PLGA/SH以共价键偶联方式展示和携载抗原rPA，对所构建的两种纳米疫苗进行表征。<br>　　（2）对构建的两种不同抗原展示方式的纳米疫苗开展细胞水平免疫效应评价，包括两种纳米疫苗的细胞安全性、DC的抗原摄取、DC细胞活化水平研究。细胞安全性结果显示，纳米颗粒在终浓度为125μg/mL以下时，DC细胞的存活率较好（＞70%），表明构建的纳米疫苗安全性好；DC细胞摄取抗原的实验研究中，发现观察到R848/PLGA/DDAB纳米疫苗中的抗原能够更快且更多地被DC细胞摄取，这可能与其表面荷正电，更易与带负电的细胞膜表面相互作用，进而被细胞内吞；在DC的活化水平上，R848PLGA/DDAB纳米疫苗表达共刺激因子CD80和CD86的水平要强于R848/PLGA/SH纳米疫苗，而在CD40和MHCⅡ的表达上则是R848/PLGA/SH纳米疫苗的活化效果更强；两种纳米疫苗均可以显著促进DC细胞分泌Th1型IL-1β，IFN-γ和TNF-α相关细胞因子，且R848/PLGA/SH纳米疫苗能诱导更强的细胞免疫应答，这可能与不同抗原展示方式活化DC的胞内途径有差异相关。<br>　　（3）对构建的两种不同抗原展示方式的纳米疫苗开展动物水平免疫效应评价。采用BALB/c小鼠进行免疫评价，对抗体分泌水平、脾细胞活化水平、免疫记忆等进行了评估。免疫后在不同时间点，对小鼠血清中IgG及其亚型IgG1、IgG2a的抗体水平进行了测定，不同抗原展示方式的纳米疫苗均能产生特异性的抗体水平，通过ELISpot酶联免疫斑点法进一步检测了不同抗原展示方式的纳米疫苗分泌抗体的B细胞水平，其与抗体分泌水平结果一致。在毒素中和实验中，两种复合纳米疫苗激发中和抗体的水平均较高。在淋巴细胞的活化上、R848/PLGA/DDAB纳米颗粒的活化能力更强。在T细胞的免疫记忆性方面，不同抗原展示方式的两种纳米疫苗均有各自的优势，R848/PLGA/DDAB纳米疫苗能够显著增加中央记忆性CD4+T细胞的数目，而R848/PLGA/SH纳米疫苗能够显著增加效应记忆性CD4+T细胞和CD8+T细胞的数目。<br>　　综上所述，两种不同方式携载抗原的纳米疫苗制剂可以诱导较高水平的细胞和体液免疫应答，有作为疫苗佐剂的潜力。