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摘要本文主要从以下几方面进行论述：<br>　　第一部分 纤维蛋白靶向纳米粒的制备、基本性质检测和生物安全性评价<br>　　目的：制备一种由CREKA五肽修饰并包裹ICG的纤维蛋白靶向纳米粒（CREKA-ICG-LIP NPs），检测其纳米粒基本性质、稳定性及生物安全性。<br>　　方法：采用薄膜水化-声震法制备CREKA五肽修饰的脂质外壳并包裹ICG的纳米粒（CREKA-ICG-LIP NPs）；光镜及透射电镜观察纳米粒的形态和结构；使用Malvern粒径仪检测纳米粒的粒径、表面电位、聚合物分散指数（Polymer dispersity index，PDI）及稳定性；紫外分光光度计检测ICG，CREKA-LIP NPs和CREKA-ICG-LIP NPs溶液的紫外光谱图，计算靶向纳米粒中ICG的包封率(Encapsulation efficiency,EE)；采用CCK-8法检测不同浓度CREKA-ICG-LIP NPs对H9C2细胞的毒性；检测对照组和注射纳米粒1天、3天、7天14天组SD大鼠（n=5只/组）的血常规和血生化指标，HE染色观察对照组及14天组重要脏器（心、肝、脾、肺、肾）进行安全性评价。<br>　　结果：靶向纳米粒CREKA-ICG-LIP NPs外观呈暗绿色混悬液；光镜及透射电镜下观察CREKA-ICG-LIP NPs呈球形，大小均匀，分散性好；Malvern粒径仪检测CREKA-ICG-LIP NPs纳米粒平均粒径及PDI分为260.77±9.00nm(PDI=0.138)，表面电位分别为-30.50±0.78mV，纳米粒的平均粒径随时间变化的差异无统计学意义（Plt;0.05）；ICG的标准曲线为：Y=0.1538X+0.0607（R2=0.9957），纳米粒ICG的EE为86.72%；CCK-8法检测纳米粒处理后细胞活性均在90%以上；与对照组血常规及血生化指标相比，实验组指标无异常升高，14天组重要脏器HE切片无明显病理改变。<br>　　结论：本研究通过薄膜水化-声震法成功制备了靶向纳米粒CREKA-ICG-LIP NPs，纳米粒具有大小均一、分散性较好、稳定性强及生物安全性高等特点。<br>　　第二部分 纤维蛋白靶向纳米粒靶向能力及体内分布的实验研究<br>　　目的：建立并验证心肌缺血再灌注(ischemia reperfusion，IR)模型，评价靶向纳米粒（CREKA-ICG-LIP NPs）的体内外靶向能力并观察体内分布情况。<br>　　方法：通过结扎SD大鼠冠状动脉左前降支-移除结扎线的方式建立IR模型，使用心电图、TTC染色、HE染色及Masson染色等方法验证模型制备；体外靶向实验，分别将带有DiI的靶向纳米粒CREKA-ICG-LIP/DiI NPs、非靶向纳米粒ICG-LIP/DiI NPs及PBS溶液与纤维蛋白膜共孵育，观察荧光信号情况；体内靶向实验，6只IR和6只NC的SD大鼠随机分为：NC靶向组、NC非靶向组、IR靶向组及IR非靶向组（n=3只/组），尾静脉注射纳米粒溶（CREKA-ICG-LIP/DiI NPs or ICG-LIP/DiI NPs,1ml，4mg/ml），制备心脏冰冻切片，观察纳米粒和纤维蛋白分布及共定位情况；体内分布实验，靶向荧光纳米粒通过尾静脉注射到SD大鼠体内，分别在注射后1、6及24h取SD大鼠主要器官（心、肝、脾、肺、肾）制作冰冻切片观察纳米粒分布情况。<br>　　结果：IR模型结扎后心电图显示Ⅲ导联ST段抬高，术后TTC染色存在心肌缺血区，术后3周HE染色及Masson染色存在心肌纤维化，提示IR模型成功建立；体外靶向实验发现，靶向组比非靶向组及PBS组纤维蛋白膜荧光信号强；体内靶向实验发现，与NC组相比IR组损伤区纤维蛋白信号更强（Plt;0.0001），与IR非靶向组相比IR靶向组发现大量纳米粒信号（Plt;0.0001）且纳米粒与纤维蛋白有良好的共定位；体内分布实验发现，循环1h后，肝脏和脾脏出现较弱荧光信号，循环6h，肝脏和脾脏信号强度增加，肾脏出现微弱荧光信号，循环24h，肝、脾和肾荧光信号较前均降低，心肺未见明显信号。<br>　　结论：靶向纳米粒CREKA-ICG-LIP NPs与纤维蛋白结合能力强，体内实验发现其能通过血管内皮间隙，有效的与心肌损伤区出现的纤维蛋白结合，证实CREKA-ICG-LIP NPs纳米粒具有良好的体内外靶向能力；纳米粒体内分布主要出现在肝、脾及肾，表明其经过肝-脾系统代谢及肾脏排泄。<br>　　第三部分 纤维蛋白靶向纳米粒光声成像用于检测心肌梗死区的实验研究<br>　　目的：制备纤维蛋白靶向纳米粒（CREKA-ICG-LIP NPs），评价其用于检测心肌梗死区的光声成像的效果。<br>　　方法：体外光声成像实验，使用光声成像仪在680nm-970nm扫描CREKA-ICG-LIP NPs（ICG,200μg/ml）纳米粒溶液，确定最佳激发波长；采集不同浓度CREKA-ICG-LIP NPs（ICG,0-400μg/ml）、CREKA-LIP NPs（2mg/ml）及PBS溶液的光声图像，并使用系统软件测量每个感兴趣区ROI（region of interest，ROI）的光声信号值；收集CREKA-ICG-LIP NPs（ICG，200μg/ml）随时间延长（0、4、8、12h）的光声图像并测量光声信号值以检测纳米粒光声稳定性；体内光声成像实验，制6只IR模型大鼠并随机分为：靶向组和非靶向组（n=3只/组），经尾静脉注射靶向或非靶向纳米粒(CREKA-ICG-LIP NPs或ICG-LIP NPs，1ml，4mg/ml)，收集其在手术前、手术后、注射后0min及注射后60min心脏区域的光声图像并测量光声信号强度，图像收集完毕后，取心脏进行TTC染色。<br>　　结果：体外光声成像实验发现，835nm是CREKA-ICG-LIP NPs光声成像的最佳激发波长；未包裹ICG的纳米粒（CREKA-LIP NPs）及PBS溶液无光声信号，而包裹ICG的纳米粒（CREKA-ICG-LIP NPs）有光声信号出现，其光声信号强度与纳米粒浓度有良好的线性关系，线性回归方程：Y=0.0068X+0.0983（R2=0.9943），且CREKA-ICG-LIP NPs（ICG，200μg/ml）的光声信号强度不会随时间推移而改变；体内光声成像实验发现，靶向组和非靶向组大鼠术前和术后心脏区域均未观察到光声信号，纳米粒体内循环60min后，靶向组的心脏前壁区域发现有光声信号存在，而非靶向组心脏前壁区域未见光声信号，靶向组比非靶向组光声信号值有统计学意义上升高（Plt;0.0001）,TTC染色观察靶向组与非靶向组均存在心肌缺血区。<br>　　结论：纤维蛋白靶向纳米粒（CREKA-ICG-LIP NPs）体外激发后可以产生光声信号并具有良好光声稳定性，体内循环后可通过损伤区增宽的血管内皮间隙到达心肌损伤区，并与纤维蛋白结合实现对损伤区特异性的光声成像。