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摘要目的：研究TANK结合激酶1(（TANK-binding kinase1，TBK1)在诱导Kupffer细胞（Kupffer cells,KCs）内毒素耐受中的作用。<br>　　方法：建立内毒素耐受模型，即用小剂量（10ng/ml）LPS刺激KCs24h后，再用大剂量（1000ng/ml）LPS刺激。同时建立KCs非耐受模型，即KCs培养24h后，直接用大剂量（1000ng/ml）LPS刺激。收集上述细胞模型，进行以下检测：①western blotting检测TBK1、p-TBK1、c-Myb、DTX4、NF-κB和p-NF-κB蛋白水平；②RT-PCR测c-Myb、DTX4、TNF-α和IL-10的mRNA表达；③ELISA检测细胞上清TNF-α和IL-10的含量；④利用ChIp实验验证c-Myb对DTX4转录的影响；⑤激光共聚焦观察KCs内p-TBK1的分布情况。转染siRNA干扰TBK1表达后检测耐受组相关蛋白，mRNA表达情况。并利用缺陷慢病毒调控巨噬细胞中c-Myb表达，研究过表达以及沉默c-Myb后对DTX4，TBK1以及内毒素耐受的影响。<br>　　建立小鼠内毒素耐受模型，观测小鼠的生存率并收集外周血和肝脏组织①HE染色观察小鼠肝脏组织炎症情况；②ELISA检测血清TNF-α和IL-10的含量；并检测小鼠血清AST，ALT水平，了解小鼠肝功能状况③免疫组织化学检测小鼠中磷酸化TBK1的表达情况。使用TBK1抑制剂MRT67307抑制TBK1表达后再检测上述指标。在小鼠体内通过慢病毒敲低c-Myb后建立内毒素耐受模型，通过HE染色观察小鼠的肝脏损伤程度，检测血清中TNF-α和IL-10的含量；并检测AST，ALT水平，了解小鼠肝功能状况。<br>　　结果：建立体外细胞内毒素耐受、非耐受模型后，耐受组磷酸化TBK1水平明显高于非耐受组（ET:0.8505±0.05361N=3,NET:0.5971±0.03383N=3,Plt;0.05），通过siRNA成功敲低TBK1后（Normal：0.9504±0.05772N=3，siTBK1:0.3150±0.04815N=3，Plt;0.05），TBK1诱导内毒素耐受的作用减弱，耐受组TNF-α（ET:31705±567.5N=3,ET+siTBK1:37368±1163N=3），iNOS（ET:10733±752.4N=3,ET+siTBK1:15670±1096N=3,Plt;0.05）表达增加；在建立小鼠经典内毒素耐受模型后，与体外模型结果一致，免疫组织化学检测结果显示耐受组小鼠肝脏TBK1磷酸化水平高于非耐受组。使用MRT67307（TBK1抑制剂）后，耐受组小鼠血清AST（ET:3.450±0.3072N=3,ET+MRT67307:4.388±0.1182N=3），ALT（ET:1.582±0.2431N=3,ET+MRT673075.097±0.8023N=3,Plt;0.05）水平增加。在内毒素耐受模型中，NIK（ET:12867±295.5N=3,NET:17784±1095N=3,Plt;0.05）表达水平降低，减少了P100加工，当TBK1水平降低后，NIK受到的抑制减少，磷酸化P100增加，TBK1诱导内毒素耐受与非经典的NF-κB信号通路相关。DTX4作为TBK1的负性调控因子，能够在内毒素耐受模型中促进TBK1的K48泛素化。通过ChIp实验证明转录因子c-Myb能转录调控DTX4，并且过表达c-Myb能降低DTX4转录，而沉默c-Myb能增加DTX4转录。通过过表达c-Myb能够增加TBK1表达，从而发挥内毒素耐受作用，使得TNF-α，iNOS表达减少。<br>　　结论：TBK1能够诱导内毒素耐受，c-Myb通过负性调节DTX4，调控TBK1的K48泛素化起到调节Kupffer细胞内毒素耐受的作用。