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摘要非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholicfattyliverdisease,NAFLD）是以肝脏过度累积脂肪导致肝功能障碍为主要特征的一种慢性代谢性肝病。“多重打击”学说认为肝脏内甘油三酯的堆积是对肝脏的第一重打击，而之后产生的过量活性氧（reactiveoxygenspecies，ROS）以及炎症因子等危险因素会对肝脏造成进一步的多重连续打击，因此单纯性非酒精性脂肪性肝病可发展成为非酒精性脂肪性肝炎（nonalcoholicsteatohepatitis，NASH）以及产生纤维化并最终导致肝硬化或者肝癌。细胞色素P4502E1（CytochromeP4502E1，CYP2E1）参与许多肝内物质代谢并产生活性氧和炎症因子，对非酒精性脂肪性肝病和酒精性肝病（alcoholicliverdisease，ALD）疾病进展都有着重要的作用。而不同基因型的CYP2E1所具有的活性会有所差异，因此我们研究在不同CYP2E1基因型的情况下，非酒精性脂肪性肝病的病理是否会有所改变，同时还检测了数种细胞因子以探索CYP2E1基因对非酒精性脂肪性肝病进展的可能影响因素。<br>　　目的：<br>　　1、研究NAFLD患者的临床、实验室及肝脏病理特征，研究NAFLD患者CYP2E1不同基因分型的临床、实验室及肝脏病理特征，探讨不同CYP2E1基因型对NAFLD疾病的影响。<br>　　2、研究NAFLD患者在有无NASH和不同CYP2E1基因分型下的血清细胞因子浓度，探索细胞因子可能在CYP2E1基因和NAFLD中起到的作用。<br>　　方法：<br>　　1、入选来自**********医院自2017年3月到2019年8月间经肝脏穿刺活检证实的非酒精性脂肪性肝病患者438名，签署知情同意书，采集患者全血及血清置于-80℃超低温冰箱中保存，收集患者临床资料和实验室指标，由专业病理师在双盲情况下对肝脏病理根据非酒精性脂肪性肝病活动度评分（nonalcoholicfattyliverdiseaseactivityscore,NAS）进行读片。<br>　　2、从全血中提取438名患者的DNA，用聚合酶链反应对CYP2E1-352A＞G（rs2070672），CYP2E1-333T＞A（rs2070673），CYP2E1-9896C＞G（rs2070676），CYP2E1-4768G＞A（rs6413419），CYP2E1-71G＞T（rs6413420），CYP2E1-7632T＞A（rs6413432）变异进行分型，制作聚类散点图。<br>　　3、用Bio-Plex悬液芯片多重检测技术检测229名经肝脏活检证实的非酒精性脂肪性肝病患者血清中的细胞因子，包括白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、白细胞介素-1受体拮抗因子（interleukin-1receptorantagonist，IL-1RA）、白细胞介素-6、白细胞介素-7、白细胞介素-8、白细胞介素-9、白细胞介素-13、白细胞介素-16、白细胞介素-18、CXC趋化因子10（CXCchemokine10，CXCL10）。<br>　　4、运用免疫组化的方法，研究CYP2E1蛋白和CXCL10在肝脏组织中的分布。<br>　　5、计量资料采用平均数±标准差或者中位数（四分位间距）表示，分类资料采用频数（频率）表示。组间比较计数变量采用t检验或者非参数检验，分类变量采用卡方检验。多因素逻辑回归分析CYP2E1基因和各种肝脏病理结局之间的联系。中介因果分析探讨细胞因子在CYP2E1基因和NAFLD之间所起的作用。所有操作均在R软件上操作。<br>　　结果：<br>　　1、Rs2070672分布为AA型288人（66%），AG型133人（30%），GG型17人（4%），最小等位基因为G，最小等位基因频率为19%,Hardy-Weinberg平衡检验P值为0.84。Rs2070673分布为AA型59人（14%），TA型221人（50%），TT型158人（36%），最小等位基因为A，最小等位基因频率为39%,Hardy-Weinberg平衡检验P值为0.21。Rs2070676分布为CC型5人（1%），CG型141人（34%），GG型266人（65%），最小等位基因为C，最小等位基因频率为18%，Hardy-Weinberg平衡检验P值为＜0.01。Rs6413419全部为GG型438人（100%）。Rs6413420分布为GG型438人（100%）。Rs6413432分布为AA型21人（5%），AT型171人（39%），TT型243人（56%），最小等位基因为A，最小等位基因频率为24%,Hardy-Weinberg平衡检验P值0.23。<br>　　2、在NAFLD人群中，NASH患者较无NASH者在临床资料上，年纪更小（38±13vs44±12，P＜0.01），体重指数（bodymassindex，BMI）更高，胰岛素抵抗指数（homeostasismodelassessmentinsulin，HOMA-IR）更高（3.9(2.6-5.3)vs3.3(2.4-5.0)，P=0.04），中心性肥胖的发生率也更高（78.9%vs70.4%，P=0.04）。在实验室指标上，NASH患者有更高的谷丙转氨酶（81，47-138vs40，27-61U/L，P＜0.01），尿酸更高（416±120vs380±93，P＜0.01），更高的总胆固醇含量（5.30±1.10vs4.95±1.19，P＜0.01），更高的甘油三酯含量（2.08，1.49-2.92vs1.80，1.33-2.68，P=0.04）和更高的低密度脂蛋白（3.19±0.90vs2.93±0.93，P＜0.01）。肝脏病理上也有更严重的脂肪变，气球样变和小叶炎症程度，肝脏纤维化发生率也更高（81.6%vs72.1%，P=0.02）。<br>　　3、Rs2070673AA+AT基因型较TT基因型，谷丙转氨酶水平更高（57.0，Q1-Q3：35.8-99.2U/Lvs52.5，Q1-Q3：28.0-87.0U/L，P=0.03），其余临床资料和实验室指标无明显差异。病理上AA+AT基因型有更高的中等及以上小叶炎症和NASH发病率（26.1%vs13.3%，P＜0.01；52.9%vs40.5，P=0.01）。多元逻辑回归分析显示AA+AT基因型是中等及以上小叶炎症和NASH的危险因素比值比（oddsratio，OR）分别为2.79，95%CI：1.57-4.93，P＜0.01和1.74，95%CI：1.13-2.67，P=0.01。Rs2070672GG+GA基因型较AA基因型以及rs6413432AA+AT基因型较TT基因型，在临床资料、实验室指标和病理特征上无明显差异。多元逻辑回归分析P值无意义。<br>　　4、NASH患者较无NASH者，血清中IL-1RA、IL-18和CXCL10水平更高，分别为471.99（327.75-680.26）vs327.00（250.45-436.95），P＜0.01；80.41（60.24-98.68）vs64.36（48.29-79.25），P＜0.01；1227.25（889.47-1656.90）vs911.12（672.14-1169.21），P＜0.01。Rs2070673AA+AT基因型较TT基因型，血清中CXCL10水平更高，为1125.86（781.61-1598.38）vs957.10（713.63-1317.88），P＜0.01。<br>　　5、免疫组化显示CYP2E1广泛存在于NAFLD患者的肝脏细胞中，CXCL10散在分布于非酒精性脂肪性肝病患者的肝脏细胞中。因果中介分析显示rs2070673对非酒精性脂肪性肝炎的作用中有66%是通过增加CXCL10含量产生的。<br>　　结论：<br>　　1、NASH患者有更严重的临床和病理表现。Rs2070672、rs2070673和rs6413432在该人群中具有良好的遗传稳定性，并且rs2070673A等位基因在病理上显示更高的中等及以上小叶炎症和NASH发生率，因此是NASH的危险因素。<br>　　2、NASH患者较无NASH患者的血清中IL-1RA、IL-18和CXCL10水平更高。Rs2070673AA+AT基因型较TT型血清中CXCL10更高。CXCL10在rs2070673AA+AT基因型和NASH患者中都呈较高水平。<br>　　3、CYP2E1蛋白和CXCL10都分布于肝脏细胞中，且中介分析提示CXCL10在CYP2E1基因和NAFLD之间起着重要的中介作用。