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摘要目的:<br>　　通过构建自身免疫性肝炎（AIH）小鼠模型，研究Tim-3在AIH中的作用以及Tim-3对AIHTh17细胞的调节作用和机制。<br>　　方法：<br>　　1.收集AIH患者、健康志愿者新鲜外周全血（枸橼酸钠抗凝），流式细胞术检测两组人群外周血CD4+Tim-3+T细胞频率，用ELISA法检测两组人群血清中p-p38、MKP-1、P-JNK、IL-17A的表达水平。<br>　　2.将44只雄性C57BL/6小鼠随机分为5组：对照组（n=4）、模型组（n=10）、模型+Tim-3阻断组（n=10）、模型+IL-17A阻断组（n=10）和模型+p38阻断组（n=10）。模型组通过小鼠尾静脉注射20mg/kgConA以诱导AIH。模型+Tim-3阻断组小鼠在注射ConA前一周腹腔内注射100μgTim-3单克隆抗体抑制剂，隔天注射一次，共4次。模型+IL-17A阻断组小鼠在注射ConA前一天，腹腔内注射200μgIL-17A单克隆抗体抑制剂。模型+p38阻断组小鼠在注射ConA当天腹腔内注射15mg/Kgp38抑制剂SB203580。除对照组以外，各组小鼠通过尾静脉注射20mg/kgConA以诱导AIH。8小时后收集小鼠外周血，检测ALT、AST水平，收集小鼠脾脏，研磨并检测CD4+Tim-3+T细胞、CD4+IL-17+T(Th17)细胞表达水平，取小鼠肝脏检测Tim-3、MKP-1、p-p38、P-JNK、IL-17A蛋白表达水平，采用HE染色观察肝组织病理变化。<br>　　3.统计分析:所有统计分析均使用SPSS22.0软件。所有数据均以平均值±标准差（SD）表示。符合正态分布且方差齐性的计量资料两组之间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较使用LSD检验。P值＜0.05提示差异具有统计学意义。<br>　　结果：<br>　　1.流式细胞术显示AIH组人外周血CD4+Tim-3+T细胞频率为22.2±2.7，低于对照组31.4±3.7（p＜0.05）。ELISA检测健康人群血清样本IL-17A（35.9±6.3）、p-p38（67.1±18.0）和p-JNK（137.1±36.1）、MKP-1（215.6±32.0）及AIH患者IL-17A（43.7±5.6）、p-p38（96.9±20.0）和p-JNK（185.1±40.6）、MKP-1（180.4±28.6），结果提示AIH患者IL-17A（p＜0.01）、p-p38（p＜0.001）和p-JNK（p＜0.05）水平升高，而MKP-1水平降低（p＜0.01）。<br>　　2.在ConA诱导的AIH小鼠中，我们观察到肝脏结构显著损害以及空泡和淋巴细胞浸润。AIH模型小鼠的炎症和病理变化程度（G1至G2级）以及ALT（315.7±198.9）和AST（385.9±174.0）水平显著高于对照组（p＜0.05），提示我们成功建立了AIH小鼠模型。模型+Tim-3阻断组小鼠肝脏样品，HE染色显示明显淋巴细胞浸润和大量空泡。Tim-3阻断组小鼠血清ALT（1180.5±567.5）和AST（954.8±392.0）水平显著高于模型组（p＜0.05）。在模型+p38阻断组小鼠肝脏样本中，炎症细胞浸润减少，肝小叶完整，肝索呈放射状排列。与模型组相比，血清ALT水平（151.6±131.5）降低（p＜0.05），AST水平（308.0±116.1）无显著差异（p＞0.05）。与模型组相比，IL-17A阻断组小鼠肝脏组织炎症细胞浸润较少，血清ALT水平较低（123.1±58.5）（p＜0.05），AST水平（454.5±325.8）无显著差异(p＞0.05）。<br>　　3.模型组小鼠CD4+Tim-3+T细胞（12.4±2.9％）和CD4+IL-17+T细胞（0.84±0.25％）频率与对照组(CD4+Tim-3+T细胞，4.6±1.9%)(p＜0.01)(CD4+IL-17+T细胞，0.37±0.05%)(p＜0.01)相比显著升高。Tim-3阻断组CD4+Tim-3+T细胞频率与模型组小鼠相比无明显差异（8.3±3.2％），而CD4+IL-17+T细胞频率增加（1.6±0.5％）(p＜0.01)。此外，我们注意到，p38阻断组CD4+Tim-3+T细胞（8.4±3.2％）(p＜0.05)和CD4+IL-17+T细胞频率（0.59±0.12％）(p＜0.05)以及IL-17A阻断组（CD4+Tim-3+T细胞，7.6±1.5％，p＜0.05；CD4+IL-17+T细胞，0.52±0.13％，p＜0.05)与对照组相比显著降低，表明p38影响Th17细胞和Tim-3表达水平。<br>　　4．AIH小鼠模型肝组织IL-17A、p-JNK和p-p38表达水平明显高于对照组（p＜0.01）。此外，AIH小鼠模型中Tim-3和MKP-1蛋白水平显著高于对照组（P＜0.001）。同样，用抗Tim-3抗体阻断Tim-3信号通路，ConA处理后，IL-17A、MKP-1和p-p38表达水平进一步上调，而p-JNK表达水平下调。这些结果表明，Tim-3途径可能对IL-17A和p38有调节作用。此外，在抗IL-17A和p38阻断组中，Tim-3、IL-17A、MKP-1、p-JNK和p-p38表达水平均显著下调。<br>　　结论：<br>　　1.AIH患者Tim-3表达水平降低，IL-17A、p-p38和p-JNK水平升高，MKP-1水平降低，促进自身免疫性肝炎发展。<br>　　2.ConA诱导的AIH小鼠模型激活p38并抑制MKP-1水平，从而激活CD4+T细胞分化为Th17细胞，上调IL-17A表达。<br>　　3.阻断Tim-3途径，激活p38和抑制MKP-1会导致IL-17A水平显著升高，并加重肝脏损害。