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摘要第一部分：GABA相关蛋白在瑞芬太尼诱导痛觉过敏中的不同表达<br>　　目的：探究瑞芬太尼痛觉过敏大鼠脊髓腰膨大部位GABAAα2R、GAT1、GAD67、GAD65和KCC2蛋白的时间依赖性表达变化。<br>　　方法：将42只雄性SD大鼠随机分成7组（n=6）：对照组（C组）、瑞芬太尼4h组（4h组）、瑞芬太尼8h组（8h组）、瑞芬太尼16h组（16h组）、瑞芬太尼24h组（24h组）、瑞芬太尼48h组（48h组）和瑞芬太尼72h组（72h组），造模前7天进行鞘内置管。大鼠尾静脉以1.2μg·kg?1·min?1的速率泵注瑞芬太尼1小时，泵注开始后10分钟在左足作一外科切口。分别于造模前、造模后4小时、8小时、16小时、24小时、48小时和72小时测定各组大鼠左右两侧足底机械缩足反应阈值（Mechanismwithdrawalthreshold，MWT）。每次行为学测试结束后，采用Westernblotting方法测定脊髓腰膨大部位GABAAα2R、GAT1、GAD67、GAD65和KCC2蛋白的表达情况。<br>　　结果：1、与C组相比，瑞芬太尼组NR2B蛋白的表达水平在瑞芬太尼输注后48小时明显升高（P＜0.01），而GABAAα2R蛋白的表达水平无统计学差异（P＞0.05）。2、与C组相比，瑞芬太尼输注后4小时、8小时、16小时、24小时、48小时和72小时的MWT均明显降低（P＜0.01）。与右足（非切口足）相比，左足（切口足）的MWT在瑞芬太尼输注后的4小时和8小时明显下降（P＜0.01）。3、与C组相比，瑞芬太尼组GABAAα2R、GAT1、GAD67、KCC2蛋白的表达均呈现先降低后升高的时间依赖性改变。其中GABAAα2R蛋白在瑞芬太尼输注后16小时和24小时表达明显下降（P＜0.05），GAT1和GAD67蛋白表达水平分别在8小时（P＜0.05）和4小时表达最低（P＜0.01），KCC2蛋白表达水平在48小时达最低值（P＜0.01）。而GAD65蛋白的表达水平无统计学差异（P＞0.05）。<br>　　结论：瑞芬太尼暴露可抑制早期GABA能神经递质的释放，引起GABAAα2R水平的下调，证明GABA能系统参与了瑞芬太尼输注后痛觉过敏的早期启动。<br>　　第二部分：鞘内注射KCC2激动剂增强GABA-A受体对瑞芬太尼痛觉过敏大鼠镇痛作用的研究<br>　　目的：探究鞘内注射KCC2激动剂联合GABA-A受体激动剂后对瑞芬太尼痛觉过敏大鼠行为学以及脊髓GABAAα2R、KCC2和c-fos蛋白表达的影响。<br>　　方法：1、将48只雄性SD大鼠随机分成8组（n=6）：对照组（C组）、瑞芬太尼组（RI组）、GABAR激动剂低剂量组（Mus-low组）、GABAR激动剂中等剂量组（Mus-medium组）、GABAR激动剂高剂量组（Mus-high组）、KCC2激动剂低剂量组（CLP-low组）、KCC2激动剂中等剂量组（CLP-medium组）和KCC2激动剂高剂量组（CLP-high组）。瑞芬太尼输注前30分钟鞘内注射试验药物，分别于造模前、造模后4小时、8小时、16小时和24小时测定各组大鼠右足机械缩足反应阈值（MWT）。最后一次行为学测试结束后，测定脊髓腰膨大部位GABAAα2R或KCC2的蛋白表达情况。2、将30只雄性SD大鼠随机分成5组（n=6）：对照组（C组）、瑞芬太尼组（RI组）、GABAR激动剂组（Mus组）、KCC2激动剂组（CLP组）和激动剂联合组（MC组）。瑞芬太尼输注前30分钟鞘内注射相应的激动剂，分别于造模前、造模后4小时、8小时、16小时和24小时测定各组大鼠右足机械缩足反应阈值（MWT）。行为学测试结束后，采用Westernblotting方法测定脊髓腰膨大部位GABAAα2R、KCC2和c-fos的蛋白表达情况，免疫荧光检测脊髓组织c-fos的分布及表达变化。<br>　　结果：1、与RI组相比，激动剂中等剂量组和高剂量组的MWT明显升高，且随着鞘内给药浓度的增加，MWT呈现剂量依赖性升高（P＜0.05）。与RI组相比，激动剂中等剂量组和高剂量组的蛋白表达水平均明显增加（P＜0.05），且高剂量组与中等剂量组之间的蛋白表达水平无统计学差异（P＞0.05）。2、与RI组相比，Mus组、CLP组和MC组的MWT在瑞芬太尼输注后8-24小时明显升高（P＜0.01），且Mus组和CLP组之间无统计学差异（P＞0.05）；与Mus组和CLP组相比，MC组的MWT升高幅度更为显著（P＜0.01）。与RI组相比，鞘内给予muscimol和（或）CLP257后，大鼠脊髓组织中KCC2和GABAAα2R蛋白的表达水平显著增加（P＜0.05），且MC组的KCC2和GABAAα2R蛋白表达水平高于Mus组（P＜0.05）。3、与C组相比，RI组大鼠脊髓组织中c-fos的表达水平明显升高（P＜0.01）。与RI组相比，Mus组、CLP组和MC组的c-fos的表达水平显著下降（P＜0.01），但三组之间无统计学差异（P＞0.05）。免疫荧光结果显示瑞芬太尼暴露可激活c-fos阳性细胞，且c-fos阳性细胞主要分布在大鼠脊髓背角浅层（Ⅰ-Ⅱ板层）。给予muscimol和（或）CLP257均可显著减少c-fos阳性细胞的数量（P＜0.01）。<br>　　结论：KCC2过表达可增强GABA-A受体介导的镇痛作用，缓解术后瑞芬太尼痛觉过敏的发生。