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摘要神经胶质瘤是常见且致命的原发性肿瘤，浸润性高，常规治疗手段预后极差，生存率低。研究发现IL-13Rα2在胶质瘤等癌症细胞表面高度表达，正常细胞却不表达或痕量表达，是良好的肿瘤作用靶点。但在靶向治疗中，常规药物无法通过血脑-肿瘤屏障，无法应用于脑部肿瘤的治疗。因此，研发一类具有高亲和力、高稳定性和高组织穿透能力的小分子抗体，是临床治疗脑部肿瘤的迫切需求。研究表明软骨鱼来源的单域抗体分子量大小只有12kDa，能够穿过血脑屏障，是具有潜力的脑部疾病的治疗药物，近年来备受关注。<br>　　目的：以条纹斑竹鲨为模式生物，通过免疫筛选，获得针对IL-13Rα2的特异性鲨鱼源单域抗体，重组表达快速获取具有目标活性的特异性重组单域抗体，为临床脑胶质瘤的靶向治疗提供新思路及实验基础。<br>　　方法：条纹斑竹鲨实验室养殖系统适应一周后，随机分为两组，实验组利用IL-13Rα2与弗氏不完全佐剂进行免疫，对照组将IL-13Rα2换为PBS，其他条件控制一致，规律免疫刺激鲨鱼产生针对IL-13Rα2的特异性抗体。免疫完成后收集全血及脾脏样品。构建基因组、转录组及蛋白组文库，通过综合筛选获得特异性鲨鱼重链抗体可变区（variable new antigen receptors，VNAR）。<br>　　将筛选获得的抗体基因序列进行全基因合成，构建pET-32a-VNAR重组载体，原核表达获得重组单域抗体，利用ELISA法检测其亲和能力，细胞实验包括CCK-8、结晶紫和细胞迁移实验等检测重组单域抗体的体外活性。<br>　　结果：1）成功构建转录组文库，差异基因富集后得到若干免疫相关的基因信息；成功得到平行实验组重复VNAR序列构成的基因组文库。2）成功利用抗原亲和柱纯化免疫血清，纯化后质谱检测定量到1484个蛋白，且所有定量蛋白都在转录组文库中可对应定量。3）成功筛选得到12条预选抗体序列，全部在原核表达系统中可溶性表达，纯化获得高纯度重组单域抗体。4）重组抗体使用ELISA初步检测体外结合活性，其中9个重组抗体具有较高结合能力。5）3个重组优选蛋白进行细胞实验，结果表明优选抗体具有明显细胞杀伤作用，且杀伤作用呈剂量和浓度依赖性；同时具有抑制胶质瘤细胞迁移的作用，抑制效果显著。<br>　　结论：通过免疫条纹斑竹鲨可成功刺激其免疫系统，并诱导产生特异性抗体。且一系列免疫反应可通过脾脏及血清表征并被检测。成功利用脾脏组织及血清构建基因组、转录组、蛋白组文库，不仅填补了条纹斑竹鲨研究的空白，也可为后续筛选做基础。多组学联合筛选得到的VNAR序列重组表达后具有高亲和力，说明筛选方法可靠且有效，能够为后续类似实验做参考。pET-32a载体可将特异性单域抗体在原核系统中高表达，重组单域抗体有高亲和活性及体外活性，为临床脑胶质瘤的靶向治疗提供候选药物的研发新思路及实验基础。