检索历史 清除

摘要目的：探究抗癌生物活性肽（anti-cancerbioactivepeptide，ABP）联合奥沙利铂（Oxaliplatin，OXA）对人胃癌MKN-45、MKN-74细胞株中TOP2A与Wnt/β-catenin信号通路中关键因子的影响及胃癌荷瘤裸鼠瘤体内TOP2A的表达,初步揭示抗癌生物活性肽联合传统化疗药物抗肿瘤治疗的可能机制。<br>　　方法：①使用GEPIA平台网站（http://gepia.cancer-pku.cn/）分析TOP2A在不同肿瘤中的表达情况。②体外培养无致瘤性、具有永生化的人胃黏膜上皮细胞GES-1和四株胃癌细胞SGC-7901、BGC-823、MKN-45、MKN-74，应用Western-Blot法检测TOP2A蛋白的表达。选取MKN-45、MKN-74细胞体外培养，设立对照组（Control）、生物活性肽组（ABP）、奥沙利铂组（OXA）、生物活性肽联合奥沙利铂组（A-O），分别对两株细胞进行处理24h后，观察各组细胞形态学变化，证实细胞生长状态良好,采取指数增生期细胞应用Western-Blot技术检测TOP2A蛋白在各组中的表达情况。③选用6-8周，体重（14±2）g的SPF级裸鼠40只（♂）适应性饲养5天，按照每只0.2mL且密度为1×106/mL的MKN-45细胞悬液于裸鼠左前肢腋窝靠背部0.3cm处接种，约10天左右可于接种部位扪及类圆形瘤体，且各组肿瘤大小无明显差异,肿瘤病理学检测提示建模成功。随机分为对照组（Control）、生物活性肽组（ABP）、奥沙利铂组（OXA）、生物活性肽联合奥沙利铂组（A-O），给予药物干预。Control组（生理盐水0.5mL/只）、ABP组（诱导肽30ug/mL，0.5mL/只）、OXA组（奥沙利铂20ug/mL，0.5mL/只）、A-O组（诱导肽0.25mL/只＋奥沙利铂0.25mL/只）。腹腔注射药物，每日一次，共2周。2周后脱颈处死小鼠，取瘤体，测量各组瘤体积，HE染色验证造模情况并用免疫组化法检测瘤体中TOP2A的表达。④体外培养胃癌细胞株MKN-45及MKN-74，分别经Control、ABP、OXA、A-O处理24h后Western-Blot法检测Wnt/β-catenin通路中相关因子LEF1、TCF4及MMP7蛋白的表达情况。<br>　　结果：（1）通过GEPIA平台分析得到TOP2A在胃癌组织内的表达比正常组织增高（P＜0.05）。（2）与正常人胃黏膜上皮细胞GES-1相比，SGC-7901、BGC-823、MKN-45、MKN-74四株胃癌细胞TOP2A蛋白的表达增高（P＜0.05），且MKN-45与MKN-74细胞TOP2A蛋白的表达增高更为明显。（3）与Control组相比，经ABP、OXA及A-O处理24h后的MKN-45及MKN-74细胞分别出现贴壁性变差，细胞形态变圆，碎裂等改变。（4）动物体内实验比较各组胃癌荷瘤裸鼠的肿瘤体积，发现ABP、OXA及A-O组肿瘤体积均小于Control组（P＜0.05）。（5）Western-Blot法检测显示，与Control组相比，瘤体积均小于Control组（P＜0.05）。而使用ABP或OXA处理后的TOP2A蛋白表达变化无显著差异（P＞0.05）。（6）HE染色验证裸鼠造模情况后用免疫组化法得出胃癌荷瘤裸鼠瘤体中，ABP及OXA组与Control组相比TOP2A的表达变化无显著差异（P＞0.05），A-O组与Control组相比TOP2A表达下降（P＜0.05）（7）Western-Blot检测显示，在MKN-45细胞株中，与Control组相比，使用ABP及OXA处理细胞24h后，TCF4蛋白的表达变化无显著差异（P＞0.05），LEF1及MMP7蛋白的表达降低（P＜0.05）。在MKN74细胞株中，与Control组相比，ABP处理细胞24h后，TCF4及MMP7蛋白的表达下降（P＜0.05），但LEF1蛋白的表达变化无显著差异（P＞0.05），使用OXA处理细胞24h后，TCF4、LEF1及MMP7蛋白的表达均下降（P＜0.05）。与Control组相比，经A-O处理24h后的MKN-45与MKN-74细胞中Wnt/β-catenin通路中相关因子TCF4、LEF1及MMP7蛋白的表达均下降（P＜0.05）。<br>　　结论：<br>　　（1）TOP2A在胃癌组织及细胞中高表达，提示其与胃癌的发生发展相关。<br>　　（2）抑制TOP2A蛋白表达是抗癌生物活性肽联合奥沙利铂抑制胃癌细胞及胃癌荷瘤裸鼠肿瘤生长作用机制之一。<br>　　（3）抗癌生物活性肽联合奥沙利铂可能通过抑制胃癌细胞中TOP2A的表达间接调控Wnt/β-catenin信号通路相关因子TCF4、LEF1及MMP7的表达，从而抑制肿瘤的发展。