摘要目的利用16srRNA测序技术检测生物活性肽联合奥沙利铂作用胃癌荷瘤裸鼠肠道微生态特征,分析胃癌荷瘤裸鼠肠道微生态群落构成及多样性。为拥有自主知识产权的生物活性肽联合奥沙利铂治疗胃癌提供新的理论依据及科学数据。<br> 方法(1)模型建立:常规体外培养人胃癌MKN-45细胞,实验动物选择SPF级雄性裸鼠,6-8周龄,胃癌MKN-45细胞接种部位为裸鼠右前肢腋窝靠背部,接种胃癌MKN-45细胞浓度为2×106个/mL,每只裸鼠接种0.2mL。(2)建模后的裸鼠分组:随机取10只为一组。分为Control组、ACBP组、ACBP-OXA组、OXA组,共给药14天。(3)裸鼠粪便样本收集:在无菌环境下提取裸鼠粪便,以免造成外界菌群对裸鼠自身肠道菌群的影响。(4)记录胃癌裸鼠成瘤体积。(5)对各组瘤组织进行HE染色。(6)粪便基因组提取。(7)16srRNAV3-V4可变区扩增及测序。(8)生物信息学:计算OUT数据并对16srRNA数据进行质控。(9)菌群结构多样性分析。<br> 结果(1)ACBP-OXA联合治疗可显著抑制胃癌荷瘤裸鼠皮下成瘤,ACBP-OXA联合治疗提高了OXA的疗效,通过减少OXA的使用剂量降低了其毒性,可能具有增敏减毒的作用。(2)HE分析结果显示,ACBP-OXA组肿瘤细胞减少,细胞核淡染,染色质细腻,呈玻璃样变。(3)16srRNA测序结果发现,各组间关联密切,结果呈现多样性、丰富度及测序深度指数达到实验所需要求。(4)ACBP治疗组和ACBP-OXA治疗组通过改变裸鼠肠道细菌分布多样性及细菌群落结构,从而对肿瘤引起的肠道菌群紊乱具有改善和恢复作用。(5)ACBP、OXA、ACBP-OXA治疗可通过增加毛螺菌科NK4A136和拟杆菌菌群相对含量,抑制炎症和肿瘤发生与发展。(6)OXA和ACBP-OXA治疗可能通过降低另枝菌属的含量起到治疗作用。(7)ACBP及ACBP-OXA治疗可能通过降低肠道理研菌及肠道葡萄球菌的含量从而减轻肠道炎症反应,进而抑制肿瘤的发生和发展。(8)ACBP单独治疗乳酸菌含量相对增加,推测ACBP可能通过促进乳酸菌的定殖,从而抑制肿瘤细胞生长。<br> 结论(1)ACBP-OXA治疗组可以显著抑制裸鼠体内成瘤,联合治疗可减少OXA剂量,提高OXA的疗效,具有增敏减毒的作用。(2)ACBP治疗及ACBP-OXA治疗可通过改变裸鼠肠道细菌分布多样性及细菌群落结构,从而改善和恢复肿瘤引起的肠道菌群紊乱。(3)ACBP-OXA治疗可通过增加毛螺菌科NK4A136和拟杆菌菌群相对含量,降低另枝菌属、理研菌及肠道葡萄球菌的相对含量从而减轻炎症反应,进而抑制肿瘤的发生和发展。(4)ACBP单独治疗优势在于增加乳酸菌相对含量,改善肿瘤的发生与发展。ACBP单独实施与联合实施均显示出独特的调节肠道菌群,从而抑制肿瘤生长的作用,研究结果为深入研究拥有自主知识产权的生物活性肽奠定基础。
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