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摘要瘙痒是皮肤炎症如特应性皮炎以及过敏性皮炎等皮肤疾病、肝脏等其它系统疾病和药物副作用导致的常见临床表现，为临床治疗难点及未满足的医疗需求。温度敏感Ca2+通透的瞬时受体电位香草酸3型（TransientReceptor Potential Vanilloid3,TRPV3）通道在皮肤角质形成细胞中大量表达，并在毛发生长，皮肤屏障的形成以及瘙痒及特应性皮炎等方面发挥重要的皮肤生理学和病理学作用。在2012年，与杨勇教授课题组合作首次发现人类TRPV3通道功能增强点突变导致遗传性皮肤疾病—欧姆斯特综合征（Olmsted Syndrome，OS）；OS患者临床表现为脱发，脚掌和口腔周围弥漫性角化，伴随长期剧烈瘙痒。这些结果提示，特异性抑制TRPV3通道功能可能是一种治疗皮肤瘙痒和炎症的新策略。最近研究发现，天然苯乙醇苷化合物连翘酯苷B可选择性抑制TRPV3通道减轻小鼠瘙痒和角质形成细胞凋亡。而具有相似化合结构的另一种苯乙醇苷化合物毛蕊花糖苷曾被报道可缓解小鼠瘙痒和犬类皮炎，但其作用机制尚不清楚。因此推测，毛蕊花糖苷能够缓解皮肤瘙痒是通过特异性抑制TRPV3通道实现。此外，前期研究还发现，抑制TRPV3通道可减轻组胺引起的小鼠急性瘙痒，但是TRPV3通道如何参与组胺依赖瘙痒的分子机制尚不清楚。<br>　　研究目的：本研究有两个目的，一是确认天然苯乙醇苷化合物毛蕊花糖苷是否能够特异性抑制TRPV3通道功能，旨在揭示其抗瘙痒的分子药理学机制；二是探索组胺H1受体（H1R）与TRPV3的相互作用并揭示H1R-TRPV3信号通路在皮肤瘙痒中的关键作用，以及为治疗皮肤瘙痒或炎症提供新的治疗策略。<br>　　研究方法：采用全细胞膜片钳手段记录瞬时表达在HEK293细胞的TRP通道电流。利用动物行为学评价毛蕊花糖苷对TRPV3激动剂香芹酚诱导的瘙痒行为影响。利用q-PCR和Western blot分析皮肤组织胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP），炎症因子如肿瘤坏死因子（TNF）-α和白介素（IL）-6的表达水平。利用钙荧光成像及Flexstation3方法和电生理手段，研究激活Gq/11偶联的H1R对TRPV3通道的敏化作用。利用q-PCR方法评价药理学抑制TRPV3或遗传学敲除TRPV3对组胺诱导小鼠角质形成细胞或皮肤中TSLP mRNA水平的影响。<br>　　研究结果：发现天然毛蕊花糖苷呈剂量依赖性方式抑制TRPV3通道电流，并对其它亚型TRP通道（包括TRPV1，TRPV4，TRPA1和TRPM8通道）表现出较好的选择性。毛蕊花糖苷可以减轻TRPV3激动剂香芹酚诱导的急性搔抓行为和瘙痒介质TSLP以及炎性因子TNF-α和IL-6的释放。这些结果表明，毛蕊花糖苷通过特异性抑制TRPV3通道缓解皮肤瘙痒和炎症。为了近一步研究TRPV3是否参与组胺诱导瘙痒的分子机制，在HEK293细胞中共表达人源TRPV3及H1R受体。<br>　　结果表明，激活Gq/11偶联的H1R明显增强了TRPV3的配体、温度和电压敏感性以及TRPV3介导的钙内流。氯雷他定特异性阻断H1R或U73122阻断PLC能够消除激活H1R对TRPV3通道的敏化作用。细胞膜PI（4,5）P2的药理性消耗会增强TRPV3的电压和配体敏感性。此外，药理性抑制TRPV3或遗传学敲除TRPV3可降低小鼠角质形成细胞或皮肤中组胺诱导的TSLP mRNA水平升高。这些结果表明，TRPV3通道在角质细胞中通过与H1R功能偶联参与组胺依赖性瘙痒，TSLP可能是TRPV3在组胺诱导皮肤瘙痒中的关键作用分子。<br>　　研究结论：<br>　　1.毛蕊花糖苷以剂量依赖性方式选择性抑制TRPV3电流，其IC50为14.1±3.3μM。<br>　　2.毛蕊花糖苷减轻TRPV3激动剂香芹酚诱导的急性搔抓行为。<br>　　3.毛蕊花糖苷可以抑制TRPV3激动剂香芹酚诱导的瘙痒介质TSLP以及炎性因子TNF-α和IL-6的释放。<br>　　4.激活Gq/11偶联的H1R可增敏化TRPV3通道功能。<br>　　5.抑制Gq/11偶联的H1R激活能消除其对TRPV3通道的敏化作用。<br>　　6.细胞膜PI（4,5）P2的药理性消耗会增强TRPV3的电压和配体敏感性。<br>　　7.抑制TRPV3可降低小鼠角质形成细胞或者皮肤中组胺诱导的TSLP mRNA水平升高。<br>　　8.皮肤局部特异性抑制TRPV3有望成为潜在治疗皮肤瘙痒或炎症的新策略。