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摘要背景：<br>　　全球约1%的人口受到癫痫这一大类反复、无规律且刻板发作的严重大脑疾患的影响。目前有抗癫痫药物（Antiepilepticdrugs,AEDs）、切除或姑息性手术、神经调控以及饮食调节等多种治疗方法，但想要达到各型癫痫发作的完全控制仍然任务艰巨。作为成人局灶性癫痫中最严重和最常见的类型，颞叶癫痫（Temporallobeepilepsy,TLE）是药物难治性癫痫（Drug-resistantepilepsy）的代表之一。尽管来自临床的经验表明，采取例如前颞叶切除术，伴或不伴杏仁核-海马切除术等手术方案对药物难治性TLE患者的治疗效果尚可；但遗憾的是，患者手术率却不那么乐观，而且术后也伴随长期用药、并发症和后遗症等众多问题。在长达数年数十年的病程中，患者及其家庭乃至社会都面临相当大的负担。因此，迫切需要深入剖析癫痫的发病机理，建立更有效的防治策略。<br>　　TLE的一个典型特征是致痫灶伴有神经元退行性变和死亡以及脑部炎症。一方面，癫痫发作致使神经炎症反应，神经炎症提升神经元的兴奋性，进而又促进癫痫的发生；另一方面，癫痫发作可引起脑部损伤，涉及到神经元凋亡和丢失又与癫痫的发生和进展密切相关。这几者相互加剧、恶性循环，是TLE难治性所在的重要原因之一。<br>　　Rev-Erbα[也称为NR1D1（核受体亚家族1，D组，成员1）]是一种转录调控抑制性成员，是生物钟节律系统的核心组成部分。越来越多研究证明Rev-Erbα参与调节神经炎症和决定神经元的命运。例如，通过基因和药物手段干预Rev-Erbα后可使神经胶质细胞的增殖活化发生变化，影响一系列炎症介质的产生和释放。另外，在帕金森等疾病中也初步揭示了Rev-Erbα介导神经元凋亡的关键作用。这些强烈提示Rev-Erbα极可能在癫痫过程中发挥作用。因此，本课题研究Rev-Erbα在TLE致痫区的表达和细胞分布，并进一步探讨Rev-Erbα蛋白水平与TLE患者临床变量的相关性。我们还分析了Rev-Erbα的特异性激动剂SR9009治疗匹鲁卡品TLE小鼠模型的效用。<br>　　方法：<br>　　采用免疫蛋白印迹（Westernblotting）、免疫组织化学染色和免疫荧光标记等方法研究Rev-Erbα在TLE患者和匹鲁卡品急慢性TLE小鼠模型致痫组织中的表达。分析Rev-Erbα蛋白水平与3种临床特征的相关性。接下来，通过Westernblotting、免疫荧光标记染色和TUNEL凋亡染色评估SR9009对癫痫持续状态（SE）后7d小鼠海马神经炎症、神经元凋亡和神经元丢失的影响。采用视频脑电图（VEEG）记录、全细胞膜片钳和行为学研究方法观察SR9009对匹鲁卡品TLE小鼠模型的影响。<br>　　结果：<br>　　1.TLE患者颞叶新皮质致痫组织Rev-Erbα表达下调与对照组相比，TLE患者颞叶新皮质标本的Rev-Erbα蛋白水平显著下调（p＜0.001）。<br>　　2.Rev-Erbα蛋白水平与TLE临床变量的相关性<br>　　Rev-Erbα蛋白水平与术前癫痫发作频率呈负相关（Spearman：r=-0.5523，p=0.0077）。Rev-Erbα蛋白水平与手术年龄（r=-0.09785，p=0.6649）、癫痫病程（r=-0.03336，p=0.8829）无明显相关性。<br>　　3.Rev-Erbα蛋白在正常人和TLE患者中的分布及比较<br>　　在对照组中，Rev-Erbα在灰质（GM）内的神经元和白质（WM）内的胶质细胞中显示中度到强度的免疫着色。在TLE患者组，Rev-Erbα在相应区域显示弱免疫着色。通过平均光密度统计分析得出，与对照组相比，TLE组GM和WM中Rev-Erbα的表达显著降低（p＜0.001）。免疫荧光双标记实验证实Rev-Erbα与神经元标志物NeuN、星形胶质细胞标志物GFAP以及小胶质细胞标记物Iba1共定位。<br>　　4.匹鲁卡品急慢性TLE小鼠模型中Rev-Erbα蛋白水平的时间分布<br>　　匹鲁卡品诱导SE后早期和慢性期，小鼠海马和颞叶新皮质中Rev-Erbα的表达降低（p＜0.001或p＜0.05）。正常海马Rev-Erbα表达呈24h节律性振荡，但SE后早期节律性受到干扰，慢性期癫痫小鼠仍存在这种紊乱。<br>　　5.连续7d应用SR9009激活Rev-Erbα可抑制SE后海马NLRP3炎症小体活化和炎性细胞因子的产生<br>　　SR9009连续应用7d可显著降低SE后海马中NLRP3炎性体相关蛋白（NLRP3、ASC和Caspase1）和炎性细胞因子（IL-1β、IL-18、IL-6和TNF-α）的表达（SR9009处理匹鲁卡品组v.s.溶媒处理匹鲁卡品组；p＜0.001或p＜0.05）。<br>　　6.连续7d应用SR9009可减轻SE后海马星形胶质细胞增生和小胶质细胞增生<br>　　SR9009连续治疗7d可显著减少SE后海马CA1和CA3区GFAP阳性星形胶质细胞和Iba1阳性小胶质细胞数目（p＜0.001）；而且SR9009能明显降低SE后海马GFAP和Iba1蛋白水平（SR9009处理匹鲁卡品组v.s.溶媒处理匹鲁卡品组；p＜0.001或p＜0.05）。<br>　　7.连续7d应用SR9009可缓解SE后海马神经元凋亡和丢失<br>　　SR9009连续处理7d可降低SE后海马CA1和CA3区域TUNEL阳性凋亡细胞数量（p＜0.001）；SR9009能明显降低SE后海马凋亡标记物Cleaved-caspase3的蛋白水平（p＜0.001）；而且SR9009可挽救SE后海马CA1和CA3区域NeuN阳性神经元数目（SR9009处理匹鲁卡品组v.s.溶媒处理匹鲁卡品组；p＜0.001或p＜0.05）。<br>　　8.长期（9w）应用SR9009减弱TLE小鼠癫痫活动和痫样脑电发放<br>　　通过记录各组小鼠海马CA1区的脑电发现，SR9009处理匹鲁卡品组小鼠的第一次脑电图（10.31±2.615v.s.7.038±1.741d；p＜0.01）和电临床自发性发作（17.46±1.963v.s.14.36±2.404d；p＜0.05）的潜伏期明显长于溶媒处理匹鲁卡品组小鼠。在SE后第9w（慢性期），SR9009处理匹鲁卡品组小鼠的脑电图（10.5±3.017v.s.16.92±4.337次；p＜0.01）和电临床自发性发作（5.5±1.732v.s.9±2次；p＜0.01）数量以及脑电发放的振幅（286.5±47.26v.s.457.2±117.2；p＜0.05）和频率（2.167±0.7528v.s.3.5±1.269；p＜0.05）都显著少于溶媒处理匹鲁卡品组小鼠。<br>　　9.长期应用SR9009降低TLE小鼠海马CA1区神经元兴奋性突触传递<br>　　在CA1锥体神经元中，和溶媒处理匹鲁卡品组小鼠相比，SR9009处理匹鲁卡品组小鼠mEPSCs的振幅（26.07±4.026v.s.21.47±3.067pA；p＜0.01）和频率（2.7±0.4192v.s.2.187±0.4926Hz；p＜0.05）显著降低，其事件间隔和振幅累积概率分布曲线向右移；另外，二组mIPSCs的频率和振幅无差异，事件间隔和振幅累积分布相似（p＞0.05）。<br>　　10.长期应用SR9009改善TLE小鼠社交互动行为<br>　　通过社会互动实验得出，溶媒处理匹鲁卡品组小鼠在嗅闻和追逐次数以及总的交流时间上明显少于对照组（溶媒处理对照组和SR9009处理对照组；p＜0.05，p＜0.01或p＜0.001），提示其存在一定程度社交互动障碍。SR9009处理匹鲁卡品组小鼠在嗅闻次数和总的交流时间上均显著多于溶媒处理匹鲁卡品组小鼠（p＜0.05），提示SR9009可在某种程度改善TLE小鼠的社交行为。蔗糖偏好试验测评抑郁样行为未得到阳性结果。<br>　　结论：<br>　　上述一系列结果表明致痫区Rev-Erbα的表达减少参与了TLE的致痫过程；激活Rev-Erbα则具有抗神经炎症反应和神经保护作用，进一步减少异常兴奋性放电和传导，从而缓解匹鲁卡品TLE小鼠模型的癫痫发作情况和行为学异常。因此，通过未来更加系统和深入的探索，Rev-Erbα有望成为抗癫痫的新靶标。