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广西民族药当归藤指纹图谱的建立及其活血补血作用研究

摘要目的:1.建立广西民族药当归藤药材指纹图谱,为当归藤药材质量评价提供参考依据;2.当归藤活血作用研究,通过灌胃给药观察当归藤不同极性提取物对血瘀大鼠的干预作用;3.当归藤补血作用研究,通过灌胃给药观察当归藤不同极性提取物对血虚小鼠的干预作用。<br>  方法:1.指纹图谱研究:采用高效液相色谱法,采用Phenomenex Luna C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱;以乙腈-0.1%磷酸作梯度洗脱,流速:0.8mL/min;检测波长:225nm;柱温:30℃,进样量:10μL。<br>  2.活血作用研究:将SPF级SD雄性大鼠按照体重随机分组:正常对照组、模型对照组、阳性对照组、当归藤石油醚组、当归藤乙酸乙酯组、当归藤正丁醇组、当归藤水部位组。于实验第1天开始灌胃给予受试药物,剂量如下:阳性对照组(丹参片,剂量0.324g/kg)、当归藤石油醚部位组(4.2g/kg)、当归藤乙酸乙酯部位组(10.64g/kg)、当归藤正丁醇部位组(22.078g/kg)、当归藤水部位组(5.0g/kg),空白对照组和模型对照组从给药第一天开始每天灌胃给予等量蒸馏水,所有组别大鼠每天灌胃给药2次,连续灌胃给药7天。给药第1天,除正常组外,其余各组大鼠置于特制鼠笼内,然后置于(-18±2℃)冰柜连续冷冻,每天两次,每次2h,连续7d,造成寒凝血瘀证大鼠模型。整个实验过程,严格控制室温在20±2℃,动物正常饮食。末次冷冻12h后,10%水合氯醛(0.40mL/100g)麻醉大鼠,腹主动脉取血5mL,室温静置1h后,4℃条件下3500-4000r/min离心10min,分装血清,-80℃冰箱保存备用,检测相应的指标。<br>  3.补血作用研究:选用SPF级KM雌性小鼠,按照体重随机分组:正常对照组、模型对照组、阳性对照组、当归藤石油醚部位、当归藤乙酸乙酯组、当归藤正丁醇组、当归藤水部位组。于实验第1天开始灌胃给予受试药物,剂量如下:当归藤石油醚部位(5.99g/kg),当归藤乙酸乙酯部位(15.21g/kg),当归藤正丁醇部位(31.54g/kg),当归藤水部位(7.15g/kg),阳性对照组(当归补血口服液,剂量为2.6mL/kg),空白对照组和模型对照组从给药第一天开始每天灌胃给予相同容量的蒸馏水。所有组别小鼠每天灌胃给药1次,连续灌胃给药14天。在预防给药第12天和第13天,除空白对照组外,每只小鼠腹腔注射环磷酰胺80mg/kg,连续2d,制备小鼠血虚模型,造模期间仍继续给药复制血虚动物模型,空白对照组动物皮下注射等容量生理盐水。末次给药后30min,拔眼球取血,室温静置1h后,4℃条件下3500-4000r/min离心10min,分装血清,-80℃冰箱保存备用,检测相应的指标。<br>  结果:1.建立了不同产地广西民族药当归藤HPLC指纹图谱,并标定了12个共有峰,并鉴定其中的两个特征峰的成分(儿茶素和没食子酸);<br>  2.对其进行SPSS聚类分析,将不同产地的当归藤分为两类,其中的3个产地聚为一类,其他的产地聚为一类;<br>  3.12批当归藤药材HPLC指纹图谱与对照图谱的相似度均>0.9,说明各产地药材的化学成分有较好的一致性,不同产地当归藤之间没有太大的差异,但各化学成分含量存在一定的差异。<br>  4.主成分分析显示不同产地当归藤样品可以分为两类:3个产地的当归藤为一类,其他的产地的当归藤为一类;<br>  5.与空白对照组大鼠相比,模型对照组大鼠血清中TXB2含量、TXB2/6-keto-PGF1α比值、PAI-1含量、cAMP水平升高(P<0.01),6-keto-PGF1α含量、t-PA含量、t-PA/PAI-1比值下降(P<0.01);<br>  6.与模型对照组大鼠相比,当归藤不同极性提取物组可以降低大鼠血清中TXB2含量、PAI-1含量和cAMP含量;升高6-keto-PGF1α含量和t-PA含量,尤其是当归藤乙酸乙酯组和正丁醇组效果较为明显,差异具有统计学意义;<br>  7.环磷酰胺给药致使小鼠外周血中白细胞数,红细胞数,血红蛋白含量,血小板数等相应下降,说明血虚模型造模成功;<br>  8.与模型对照组小鼠比较,当归藤提取物各给药组中正丁醇组和水部位组可以明显升高环磷酰胺致血虚小鼠外周血中红细胞数、白细胞数、血红蛋白水平、红细胞比容水平和血小板数,差异有统计学意义;<br>  9.当归藤提取物各给药中正丁醇组和水部位组可以不同程度提高血虚小鼠中IL-3、EPO、G-CSF、M-CSF、VCAM-1等与造血功能有关的因子的含量,差异有统计学意义;<br>  10.当归藤提取物各给药组尤其是正丁醇组和水部位组可以不同程度提高血虚小鼠中IL-2、IL-6等与免疫功能有关的因子的含量,降低血虚小鼠脾脏指数,升高血虚小鼠的胸腺指数,差异有统计学意义。<br>  结论:1.所建的HPLC指纹图谱操作简单,方法稳定高效,且专属性强,可为后续进一步研究当归藤质量评价以及药效物质基础研究提供参考。2.当归藤不同极性提取物可显著增加环磷酰胺致血虚小鼠外周血红细胞、血小板的数量,提升血红蛋白的含量,并提高红细胞比容水平;3.当归藤能够不同程度地提高IL-2、IL-3、IL-6、EPO、G-CSF、M-CSF、VCMA-1等与造血功能相关的细胞因子的表达水平,说明当归藤具有补血作用。4.当归藤不同极性提取物可以增加大鼠血清中6-keto-PGF1α含量和降低血清中TXB2含量;5.当归藤不同极性提取物可以升高t-PA含量、降低PAI-1含量,维持血液中TXB2/6-keto-PGF1α的平衡,调节t-PA/PAI-1的平衡,纠正其平衡失调的作用,具有活血作用。

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导师 陈勇
学位信息:
广西中医药大学 药学 药物分析学(硕士) 2019年
分类号 R282.71R284.1
发布时间 2021-12-21
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