检索历史 清除

摘要目的：研究广西五眼果对小鼠免疫功能的调节作用及基于炎症免疫反应研究广西五眼果对上尿路结石的作用。<br>　　方法：1.广西五眼果水提物对小鼠免疫功能的调节作用：（1）对正常小鼠免疫功能的影响：随机将小鼠分为空白，五眼果水提物高，中，低（20，10，5g生药/kg）剂量组，药物组给予相应量药物。制备淋巴细胞悬液，培养72h，测定淋巴细胞增增殖化能力，与K562细胞共培养4h，测定NK细胞活性，绵羊红细胞（SRBC）免疫小鼠，利用分光光度法测定淋巴细胞悬液抗体形成细胞数目，血清溶血素，取外周血测定外周血细胞分类计数指标，复制小鼠迟发超敏反应模型，测定其耳廓重量差。（2）对免疫抑制模型小鼠免疫功能的影响：随机将小鼠分为空白，模型，高，中，低剂量组，除空白组外其他组通过环磷酰胺（80mg/kg）建立免疫抑制模型，药物组给予相应量药物。测定相应免疫指标，同（1）。（3）对免疫亢进模型小鼠免疫功能的影响：随机将小鼠分为空白，模型，高，中，低剂量组，除空白组外其他组通过左旋咪唑（100mg/kg）建立免疫亢进模型模型，药物组给予相应量药物。测定相应免疫指标，同（1）。<br>　　2.广西五眼果水提物对结石模型小鼠炎症免疫反应的影响：随机将小鼠随机分为空白，模型，高，中，低剂量，阳性组（荡石片），除空白组外其他组给予小鼠诱石剂（0.75%乙二醇+0.75%氯化铵+10%葡萄糖），建立上尿路结石模型，药物组给予相应量药物，测定相应免疫指标，同1.1；测定IL-6，TNF-α，IFN-γ，IL-4含量炎症指标；取肾脏组织进行进行病理形态学观察；蛋白质印迹法（Western Blot）测定肾脏组织OPN表达量。<br>　　3.广西五眼果水提物对HKC晶体损伤模型的影响：通过COM晶体干预，建立HKC晶体损伤模型，给予五眼果水提物含药血清干预，MTT法测定细胞存活率，试剂盒测定细胞上清液LDH，IL-6，TNF-α，IFN-γ，IL-4含量，Western Blot法测定HKC细胞OPN表达量。<br>　　4.广西五眼果水提物对RAW264.7炎症模型的影响<br>　　通过LPS诱导，建立RAW264.7炎症模型，给予五眼果水提物含药血清干预，MTT法测定测定细胞存活率，试剂盒测定细胞上清液IL-6，NO含量。<br>　　结果：1.对正常小鼠免疫的影响：（1）与空白组比较，三个剂量组胸腺，脾脏脏器系数无显著变化（P＞0.05）；B,T淋巴细胞增殖转化能力无显著变化（P＞0.05）；三个剂量组NK细胞杀伤力均显著降低（P＜0.05或P＜0.01），抗体形成细胞数显著增加（P＜0.01）；低剂量组血清溶血素含量升高（P＜0.05），其他剂量影响不显著（P＞0.05）；三个剂量组外周血WBC，RBC，HGB，LymPH%，MONO%，NEUT%，EO%无显著变化（P＞0.05）；迟发超敏反应模型组耳廓重量差显著增加（P＜0.01），与模型组比较，三个剂量组耳廓重量差无显著变化（P＞0.05）。（2）对免疫抑制小鼠免疫的影响：与模型比较，中剂量组脾脏脏器系数显著增加（P＜0.05）；中，低剂量胸腺脏器系数显著增加（P＜0.05）；三个剂量组B细胞转化增殖能力显著增强（P＜0.05）；三个剂量组NK细胞杀伤力增强（P＜0.05）；三个剂量组抗体形成细胞数目显著增加（P＜0.05）；高，中剂量组血清溶血素含量显著升高（P＜0.05）；三个剂量组WBC数目显著提高（P＜0.05），外周血其他指标变化不显著（P＞0.05）。（3）五眼果水提物对免疫亢进小鼠免疫的影响：与模型组比较，高剂量组脾脏脏器系数显著降低（P＜0.05）；三个剂量组胸腺脏器系数变化不显著（P＞0.05）；中，低剂量组T淋巴细胞增殖转化力显著降低（P＜0.05）；三个剂量组NK细胞杀伤力变化不显著（P＞0.05）；三个剂量组抗体形成数目显著降低（P＜0.05），三个剂量组血清溶血素含量显著降低（P＜0.05）；高剂量组WBC，NEUT%，EO%（P＜0.05）显著降低，低剂量组NEUT%显著升高（P＜0.05）。<br>　　2.广西五眼果水提物对结石模型小鼠炎症免疫反应的影响：与模型组比较，高剂量组尿Ca2+，Cr含量显著降低（P＜0.05），三个剂量组尿草酸含量显著降低（P＜0.05），BUN含量有降低趋势（P＞0.05）；低剂量组胸腺脏器系数显著降低，高剂量组肾脏脏器系数显著降低（P＜0.05），中，低，阳性组有降低的趋势（P＞0.05）；三个剂量组血清IgG含量显著升高（P＜0.01），中，低剂量，阳性组组血清IgA含量显著升高（P＜0.05）；三个剂量组，阳性组白细胞数目显著升高（P＜0.01），NEUT%显著升高（P＜0.01）。三个剂量组，阳性组LymPH%显著降低（P＜0.05或P＜0.01）；三个剂量组，阳性组IL-6含量均有降低的趋势（P＞0.05），高，中剂量组TNF-α含量有降低的趋势（P＞0.05），阳性组显著降低TNF-α含量（P＜0.05），三个剂量组，阳性组IFN-γ含量显著降低（P＜0.01），个剂量组，阳性组IL-4/IFN-γ显著升高（P＜0.05），脏病理学评分显著降低（P＜0.05）。空白组尿液未观察到草酸钙COD晶体（四角双锥形），模型组小鼠尿液出现大量且粒径较大的COD晶体，高，中，低剂量组，阳性组尿液COD晶体数量减少，粒径减小。Western Blot可检测到各组小鼠肾脏组织中均存在OPN蛋白的表达，空白组小鼠肾组织中OPN表达较弱；模型组小鼠肾组织中OPN蛋白表达著高于空白组（P＜0.05），相比模型组三个剂量组，阳性组OPN表达量显著降低（P＜0.05）。<br>　　3.五眼果水提物含药血清对HKC晶体损伤模型的影响：与模型组比较，中，低剂量组存活率显著增加（P＜0.05）。三个剂量组上清液LDH含量显著降低（P＜0.01）。低剂量组细胞上清液IL-6含量降低（P＞0.05）。细胞显微镜图片可观察到晶体颗粒，未能观察到细胞形态的明显变化。<br>　　4.五眼果水提物含药血清对RAW264.7炎症模型的影响：与模型组比较，高，中剂量组IL-6含量显著降低（P＜0.05）。高，中，低剂量显著降低NO含量（P＜0.01）。<br>　　结论：1.五眼果水提物对小鼠免疫功能具有双向调节作用：（1）对正常小鼠整体免疫功能影响不大。（2）对免疫抑制模型，通过增加胸腺脾脏脏器系数；增强B细胞转化增殖能力，NK细胞杀伤力；增加抗体形成细胞数目；血清溶血素含量；提高WBC数目，达到上调免疫的作用。（3）对免疫亢进模型，通过降低脾脏脏器系数；降低T淋巴细胞增殖转化力；降低抗体形成数目；降低血清溶血素含量；升高NEUT%，降低WBC，NEUT%，EO%；达到下调免疫的作用。<br>　　2.小鼠肾结石的发生伴随着炎症免疫反应，五眼果水提物可通过升高血清IgG，IgA含量；升高WBC，NEUT%；降低LymPH%；降低IL-6，TNF-α，IFN-γ含量；升高IL-4/IFN-γ值，减轻模型小鼠炎症免疫反应，抑制OPN高表达，达到减少，消除小鼠肾结石的目的。<br>　　3.五眼果水提物含药小鼠血清可通过减少HKC晶体损伤模型细胞上清LDH，IL-6含量，提高细胞存活率，达到减轻HKC晶体损伤及其导致的炎症反应，抑制OPN高表达，达到减少，消除HKC晶体损伤的目的。<br>　　4.五眼果水提物含药血清可通过降低RAW264.7炎症模型细胞上清液IL-6，NO含量，减轻炎症模型炎症反应。