摘要目的:研究氧化三甲胺(trimethylamine-N-oxide,TMAO)是否通过抑制平滑肌22alpha(smoothmuscle22alpha,SM22α)促进血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMCs)的炎症反应,为以后临床治疗提供依据。<br> 方法:<br> 1.分别用0和100μmol/L的TMAO处理VSMCs,验证TMAO对VSMCs的影响;用最适浓度TMAO处理VSMCs0、6、12、24h,作为时间梯度组,通过Westernblot技术检测SM22α,选取TMAO作用于VSMCs的最适刺激时间。<br> 2.用100μmol/LTMAO处理VSMCs24h,采用Westernblot技术检测IL-1β、IL-6、TNF-α表达,明确TMAO对VSMCs炎症因子的影响。<br> 3.构建过表达SM22α的质粒载体,用pEX3-SM22α转染VSMCs24h,使细胞过表达SM22α后,再给予细胞TMAO处理,通过Westernblot技术检测上述炎症因子表达,以明确TMAO是否通过SM22α调控炎症因子的表达。<br> 结果:1.TMAO抑制SM22α表达,TMAO组与Con组相比,TMAO可以明显抑制VSMCs中SM22α的表达,差异具有统计学意义(P<0.005),最适刺激时间为24h,TMAO24h处理组与0h处理组相比,SM22α的表达降低,差异具有统计学意义(P<0.05);2.Westernblot结果显示,TMAO组与Con组比较,TMAO可以促进VSMCs中IL-1β表达量增高,差异具有统计学意义(P<0.05);IL-6、TNF-α表达量明显增高,差异具有统计学意义(P<0.005);3.构建过表达SM22α质粒载体转染VSMCs,Westernblot检测SM22α表达,结果显示,pEX3-SM22α+TMAO组较pEX3-Con+TMAO组VSMCs的SM22α表达量升高,差异具有统计学意义(P<0.005);4.过表达SM22α的VSMCs在经过TMAO处理后,结果显示pEX3-SM22α+TMAO组较pEX3-Con+TMAO组VSMCs的IL-1β、IL-6、TNF-α表达量降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)<br> 结论:<br> TMAO可以促进炎症反应且是通过抑制SM22α促进了炎症反应。
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