换一批
换一批摘要叶绿体转运子是介导前体蛋白进入叶绿体的重要元件，其中定位于叶绿体外被膜的转运子称为TOC，内被膜的转运子称为TIC。而在TIC转运复合体中Tic110蛋白常被认为是候选的跨膜转运通道蛋白，但目前的证据仍然不足。其主要原因在于该蛋白的三维空间结构并不清楚，Tic110蛋白的内被膜定位形式也不明确，这严重影响了人们对Tic110参与叶绿体发育过程的认识。为此，本课题以拟南芥Tic110（AtTic110）为研究对象，针对其长C端区域进行了大量截短体构建。经大肠杆菌BL21(DE3)异源表达后，依次采用镍离子亲和层析、肝素亲和层析以及凝胶过滤层析对不同截短体蛋白进行了纯化尝试，并对其中性质较好的蛋白进行了结晶条件的初步筛选和负染电镜观察。<br> 目前所获得的初步结果如下：<br> （1）成功构建了8种AtTic110?N重组表达载体，并分别在大肠杆菌中进行了表达尝试。获得了两种性质较好的截短体蛋白，分别是AtTic110(143-700)和AtTic110(143-1016)。<br> （2）每升菌液可获得0.6~1.0mgAtTic110(143-700)蛋白样品。通过对AtTic110(143-700)蛋白结晶条件的初步筛选，得到了4种晶体形状相对较好的结晶条件。但因晶体体积小，尚未进行X射线衍射，后期还需对其进行进一步的优化。<br> （3）每升菌液可获得1.0~1.5mgAtTic110(143-1016)蛋白样品。经晶体初筛，目前尚未获得蛋白晶体。但透射电镜的负染结果表明：蛋白性质较好，可尝试采用冷冻电镜对其进行后续研究。
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