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PFN2在食管鳞状细胞癌中的表达及其作用的研究

摘要背景<br>  我国食管癌发病率在全球排名第五,其主要组织病理类型是鳞状细胞癌,且分布具有显著的地域差异。由于食管癌患者初诊时多数处于中晚期,另外治疗后的高转移率及高复发率,导致预后较差。因此需要探索新的治疗靶点来改善食管癌患者的预后。Profilin2(PFN2)是一种肌动蛋白结合蛋白,可对肌动蛋白反应进行调节而影响细胞运动。研究发现PFN2与恶性肿瘤的增殖、凋亡、浸润及转移相关。生物信息学发现PFN2在食管癌组织中高表达,提示PFN2表达水平的增高可能与食管癌的病理过程相关。因此,PFN2可能是食管癌治疗的一个靶向基因。<br>  目的<br>  通过检测食管鳞状细胞癌组织中PFN2的表达状态,并结合临床病理资料分析其与食管鳞状细胞癌患者的年龄、性别、肿瘤分化程度、有无淋巴结转移、pTNM分期及生存预后的关系;通过细胞功能实验探讨人食管癌细胞增殖、迁移、侵袭中PFN2的作用,为食管鳞状细胞癌患者的治疗提供可能的相关基因靶点。<br>  方法<br>  1.通过免疫组化(immunohistochemistry,IHC)检测食管鳞状细胞癌石蜡包埋组织样本和对应癌旁正常组织样本中PFN2蛋白的表达,并分析PFN2蛋白的表达差异与此类肿瘤患者的年龄、性别、肿瘤分化程度、有无淋巴结转移、pTNM分期及生存期的关系。<br>  2.选取食管癌细胞株KYSE410和EC109,通过LipoGeneTM2000PlusTransfectionReagen脂质体包裹PFN2过表达质粒进行细胞的转染。<br>  3.转染后通过荧光检测及实时定量聚合酶链式反应(real-timequantitativepolymerasechainreaction,qRT-PCR)检测转染效率。<br>  4.采用CCK-8实验检测人食管癌细胞KYSE410和EC109的增殖能力。<br>  5.通过划痕实验评估在PFN2影响下这两个肿瘤细胞株的迁移能力。<br>  6.基于小室侵袭实验研究其侵袭能力。<br>  结果<br>  1.IHC结果表明食管鳞状细胞癌组织中的PFN2蛋白水平相对正常食管粘膜组织高表达(P<0.001)。<br>  2.PFN2的表达与食管鳞状细胞癌的分化程度有关(P<0.05)。<br>  3.Kaplan-Meier曲线法及Cox单因素分析显示,PFN2高表达的食管鳞状细胞癌患者具有更短的总生存期(P<0.05),pTNM分期也是总生存期的独立预后因子(P<0.05)。<br>  4.重组质粒pcDNA3.1-PFN2转染后,KYSE410和EC109细胞中PFN2mRNA的表达水平显著提高(P均<0.05)。<br>  5.CCK-8实验说明PFN2可以促进KYSE410和EC109细胞的增殖能力(P均<0.05)。<br>  6.划痕实验的结果说明PFN2可以促进KYSE410和EC109细胞的迁移能力(P均<0.05)。<br>  7.Transwell小室侵袭实验结果说明PFN2可以促进KYSE410和EC109细胞的侵袭能力(P均<0.01)。<br>  结论<br>  1.PFN2在食管鳞状细胞癌组织中表达上调,其表达状态与食管鳞状细胞癌分化程度相关,高表达PFN2的患者具有更短的总生存期。提示PFN2可作为食管鳞癌潜在的分子预后指标。<br>  2.PFN2能够促进食管癌细胞的增殖、迁移、侵袭,这表明PFN2可能为食管鳞状细胞癌患者提供基因治疗的靶点。

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