摘要单胺及其前体物质(Monoaminesandtheirprecursors,MAPs)具有抗氧化、预防抑郁情绪和治疗帕金森病等功能,与人体健康和情绪调控息息相关。香蕉果实富含MAPs,目前有关香蕉果实中MAPs的研究尚不多见。本研究以‘巴西’香蕉(MusaAAAGiantcavendishcv.Baxi)、‘粉杂1号’粉蕉(MusaABBgroup,FenzaNO.1)和‘东莞大蕉’(MusaABBgroup,Dongguandajiao)为试验材料,系统地研究了香蕉果实发育与后熟过程中MAPs各组分的消长规律并筛选得到了香蕉果实中调控色氨酸(Trp)代谢的关键基因,为下一步利用基因组编辑等分子生物学手段创制富含Trp的突变体材料以及解析其合成代谢机制奠定了良好的基础。本论文的研究内容和主要结果如下:<br> (1)香蕉果实中MAPs检测方法的建立。本研究采用反相高效液相色谱-紫外检测(RP-HPLC-UV)建立了针对香蕉果实中MAPs的特异性检测方法,该方法可以准确、快速地测定香蕉果肉和果皮中去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、左旋多巴(L-dopa)、酪胺(TYRA)、酪氨酸(Tyr)、血清素(SERO)、色胺(TRM)和色氨酸(Trp)的含量。其加标回收率为95.3%至106.1%,准确度高;日内精密度范围为0.37%至0.82%,日间精密度范围为0.35%至0.83%,精确度高;检测限为0.0012至0.0016mg/100g,定量限为0.004至0.0053mg/100g,灵敏度较高;一个样品在14min内可以全部完成检测,检测速度快。<br> (2)香蕉果实发育过程中MAPs含量的变化规律。发育过程中‘巴西’、‘东莞大蕉’和‘粉杂1号’三个香蕉品种的果实中可以检测到NE、DA、L-dopa、TYRA、Tyr、SERO、TRM、Trp等8种MAPs的存在,且果皮中TRM、TYRA、L-dopa、NE、DA的含量均高于果肉。‘东莞大蕉’和‘粉杂1号’果皮中SERO、Trp和Tyr的含量高于果肉,而‘巴西’果皮中Trp和Tyr的含量低于果肉。在果实发育的前、中期‘巴西’中NE、TRM、TYRA、DA、Tyr的含量先升后降,其含量在断蕾后30天左右达到峰值。‘巴西’果肉中SERO、L-dopa、Trp的含量先升后降,其含量在断蕾后30天达到峰值。<br> (3)香蕉果实后熟过程中MAPs含量的变化规律。后熟过程中‘巴西’、‘东莞大蕉’和‘粉杂1号’的果实中可以检测到NE、DA、L-dopa、TYRA、Tyr、SERO、TRM、Trp等8种MAPs的存在。三个品种果肉中NE、SERO和TRM的含量呈下降的趋势,Tyr和Trp的含量则是先升后降,果皮中NE、DA、L-dopa、TYRA、SERO、TRM的含量均高于果肉。而‘巴西’果皮中Trp和Tyr的含量低于果肉。香蕉富含Trp、Tyr、L-dopa、SERO和DA,黄熟可食用的果肉中最高含量分别为5.99mg/100g、6.81mg/100g、3.95mg/100g、8.28和13.25mg/100g。<br> (4)影响香蕉果实色氨酸合成与代谢的关键调控基因的筛选。通过对不同发育时期‘巴西’香蕉果肉的转录组测序分析发现,断蕾后30天(CBD30)的样品与其它4个时期样品存在最多的共同差异表达基因。GO富集的结果显示,差异表达基因参与了芳香族氨基酸合成与代谢过程。KEGG富集分析结果表明,差异表达基因参与了苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸合成通路(Mus00400)、色氨酸代谢通路(Mus00380)和酪氨酸代谢通路(Mus00350),参与这3条通路的差异表达基因数目分别是42、12和20个,共72。转录组分析最终确定了6个色氨酸调控基因,基因ID分别为103990842、103987079、103974153、103980825、104000370和103995120。
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