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摘要荧光免疫杂交法与免疫酶法是目前最常用的两种肿瘤检测方法。免疫酶法操作简单、成本低廉，是常用的筛查手段，但结果较为主观，一般只能进行定性检测；荧光免疫杂交法能够进行精确的定量检测，但成本过高，难以推广。3,3''-二氨基联苯胺（DAB）是过氧化物酶最重要的显色产物之一，染色后的细胞表面附着不规则晶体颗粒状的DAB氧化聚集体，在明场下呈棕黄色，因此DAB在传统检测中常被用作染色剂，同时其在暗场下也表现出优越的散射性质，可以作为散射媒介实现细胞暗场成像。免疫组化标记物表达程度较高时，DAB的氧化产物易聚集成尺寸较大的颗粒，主要对波长较长的红光产生散射；而当标记物表达程度较低时，DAB的氧化产物颗粒或聚集体尺寸较小，主要对波长较短的黄光、绿光产生散射。本文据此提出并初步建立了基于暗场成像的新型免疫组化判读方法，利用DAB对肿瘤组织进行免疫组化暗场成像，以散射光的颜色、亮度以及染色面积等参数建立判读标准，综合反映样本的阳性程度。<br>　　计算机病理诊断的研究瓶颈主要在于样本采集、数据处理与结果判读三个方面，因而检测硬件的设置、图像采集质量以及诊断阈值的界定对提升检测的准确性起到至关重要的作用。为达到实际临床应用的标准，本文对该方法整个流程的稳定性和标准化进行了系统研究，提出并深度优化了反映样本阳性程度的图像采集方案，并在此基础上界定判读阈值，实现了较好准确性与可靠性的计算机自动化判读。本论文选取160例HER2过表达的乳腺癌肿瘤切片，以3位资深诊断医师判读结果为参照，从显微视野与红光采集量两个方面进行优化，以获得结构清晰、色彩均衡的暗场成像照片，并确定增益为4.250X，对比度为1.2，RGB三原色的亮度级别中红色为1.5，绿色为1.0，蓝色为1.0，饱和度为100时为最优采集条件。在此方案下，重新定义免疫组化判读软件，通过优化阈值，分析软件与人工判读的结果一致性得到有效提升，灵敏度与特异度分别达到95.16%与100.00%，约登指数达到0.95。<br>　　为进一步验证此方法的实际应用潜力，本文将该基于暗场成像免疫组化判读方法应用于PD-L1过表达的非小细胞肺癌的检测。基于DAB暗场散射规律建立的免疫组化判读方法，随着样本阳性程度的增加，不仅表现为标记信号强度的提升，散射光的颜色也会发生变化。对比PD-L1临床常用的两种打分标准，肿瘤细胞占比评分（TPS）只根据染色面积判断阳性程度而不考察染色程度，相比之下，根据染色细胞比例与染色程度两方面共同衡量阳性程度的组织化学评分（H-score）更能充分发挥DAB散射成像的优势。根据H-score评分方式重新界定判读阈值，成功实现了对PD-L1过表达的非小细胞肺癌免疫组化检测的计算机自动化判读。研究结果显示基于暗场成像的新型免疫组化判读方法具有较好适用性，并且具备应用于综合阳性评分（CPS）判读的潜力。