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基于信号放大技术的微小核糖核酸测定电致化学发光传感方法研究

摘要近年来,新发癌症病急剧升高,死亡人数逐年增多,癌症严重危害到了人类健康。并且,人们常常在发现患有癌症时就已经是晚期了,而晚期癌症治疗费用昂贵,且难以治愈。因此早发现,早治疗尤为重要,但是目前仍缺乏理想的特异性强的早期诊断方法。MicroRNAs(miRNAs)是一类保守进化的,内源的,微小的单链非蛋白质编码的核苷酸分子,通常长度为19-23个核苷酸。它们参与了多种生物学过程中转录后基因表达的调控,被认为是早期诊断各种癌症的关键生物标志物。MiRNA的检测可以判定肿瘤的存在,疾病进展和预后。因此,miRNA的定量检测在癌症的诊断和治疗方面有着重要意义。目前,多种检测技术以及被用于miRNA的定量检测,包括荧光、电化学和光电化学等。但是,由于miRNA原有的特点,比如体积小,丰度低,以及家族成员之间的相似性高,miRNA的准确性和灵敏检测仍然具有挑战性。因此,为了解决上述问题,我们制备了不同的量子点用以检测miRNA,论文主要研究内容如下:<br>  1、首先,我们制备了新型量子点ZnAgInS/ZnS,并将其和S2结合(S2-MZnAgInS/ZnS)。HairpinDNA1(H1)被固定在电极表面后,加入DNA-Walker和H2,从而打开H1,此时步行机开始行走。后S2-MZnAgInS/ZnS与被打开的H1结合,产生发光。由于产生的DNA-Walker与加入的miRNA-19a浓度成正比,所以此ECL生物传感器可以用于检测miRNA-19a。<br>  2、通过水热法制备了氮化硼量子点(BNQDs),并制备了纳米银(AgNPs)和纳米金(AuNPs)。通过在玻碳电极上简单地自组装PDDA/PSS薄膜后,将氮化硼量子点滴涂在电极上,之后将单链DNA(S1)修饰在BNQDs上,之后引入S2-AgNPs的偶联物,以猝灭BNQDs的发光。在加入miRNA-141/H1-MB后,BNQDs上与S1结合的S2-AgNPs被带走从而恢复量子点的发光,最后加入的H2-AuNPs会和S1共价耦合,增强量子点的发光。从而达到对miRNA-141检测的目的。使用高倍透射电镜(HRTEM),紫外(UV-vis),荧光(PL)等方法对纳米复合材料的形貌、结构和组成进行表征,通过CV法对此生物传感器进行表征。<br>  3、首先,我们分别制备了氮化硼量子点(BNQDs,作为ECL发射体)和中孔纳米二氧化硅(MSNs,作为分子门控系统)。之后,将BNQDs涂覆在双极电极(BPE)的阴极上,并用另一种ECL材料吡啶甲酰合铱(Ir(df-ppy)2(pic),缩写Firpic)和共反应物三丙胺(TPrA)校准BPE的阳极。然后,通过化学键的作用将发夹DNA(H1)有效结合到MSNs的表面上,形成DNA-MSNs共轭物,将其修饰到BNQDs的表面上,以控制滞留在MSNs孔中的葡萄糖的释放。在目标miRNA-21存在的情况下,miRNA-21会与H1结合,打开H1的发夹结构,并释放被H1阻断的MSNs中的葡萄糖,葡萄糖与葡萄糖氧化酶(GOD)反应生成H2O2,这降低了阴极处的ECL信号。另一方面,由于在阴极处产生的H2O2减少,导致流过BPE的法拉第电流增加,并且阳极处的Firpic的相应ECL信号被促进。最终,在K+和氯化血红素的存在下,H1的未反应碱基形成G-四链体,该四联体催化H2O2形成OH-。H2O2的消耗恢复了阴极的ECL,H2O2的催化还原进一步提高了BPE的法拉第电流,阳极的ECL变得更强。基于以上概念,可以通过灵敏可靠的BNQDs与Firpic的ECL强度比值来测定miRNA-21的浓度。

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