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摘要羊毛硫抗生素因其良好的生物活性和不易产生耐药性而具有较大的开发价值。前期研究在吸水链霉菌Streptomyceshygroscopicussp.SH-62全基因组序列分析中发现一个潜在的I型羊毛硫抗生素生物合成基因簇lah。本研究尝试在不同的宿主菌中异源表达该基因簇，寻找其表达产物，探究lah基因的功能。<br>　　首先选取两株常用的链霉菌Streptomycesalbus和StreptomyceslividansZAY3作为异源表达宿主，通过接合转移导入含有完整lah基因簇的BAC质粒，构建得到异源表达菌株，但HPLC分析并没有检测到预期的羊毛硫抗生素，推测可能是因为基因簇沉默或表达量太低。随后，将羊毛硫抗生素的5个关键合成酶基因lahA、lahB、lahC、lahT和lahG分为两组，分别克隆到链霉菌自主复制型载体pYH7所携带的组成型强启动子PermE和PaziA4下游，构建得到超表达质粒pWRN01。利用接合转移将pWRN01转入含有lah基因簇的异源表达菌株中，获得超表达菌株。遗憾的是其发酵产物的HPLC分析仍然没有获得羊毛硫肽的信号。RT-PCR分析显示在异源表达菌株和超表达菌株中羊毛硫前体肽的编码基因lahA均能够正常转录表达，同时qRT-PCR数据表明超表达菌株中lahA基因的转录水平较异源表达菌株有显著提高，证实超表达菌株的构建策略没有问题，而产物的检测和鉴定方法可能需要优化或改进。<br>　　其次，选择常用于蛋白表达的大肠杆菌EscherichiacoliBL21(DE3)作为异源表达的宿主菌。将合成羊毛硫前体肽的结构基因lahA、脱水酶基因lahB和环化酶基因lahC，分别克隆到表达载体pRSFDuet和pACYCDuet中，通过双质粒共表达体系实现3个关键合成酶基因在同一细胞中的表达。其中，前体肽LahA的N端融合了GFP标签，既方便检测又可以减少羊毛硫肽对大肠杆菌细胞的毒性。荧光显微镜观察到双质粒共表达菌株在IPTG诱导下可以产生带有绿色荧光信号的融合蛋白GFP-mLahA。通过亲和层析分离纯化到4.1mg/mL的GFP-mLahA蛋白，利用WELQ蛋白酶将GFP标签切除后得到羊毛硫前体肽mLahA。同时还构建了超量表达和纯化修饰酶LahB、LahC和LahG的蛋白表达菌株，获得纯化后的LahB蛋白，为后期在体外研究羊毛硫前体肽的翻译后修饰反应奠定了基础。