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红花及高乌头中有效成分的提取与工艺优化

摘要菊科植物红花(CarthamustinctoriusL.)具有活血通经、去瘀止痛等功效,其花中主要活性成分为黄酮类化合物;红花种子经压榨提油后得到的红花籽粕中富含丰富蛋白质,可作为一种优质的新兴蛋白质资源。毛茛科高乌头(AconitumsinomontanumNakai)具有镇痛、抗心律失常、抗炎消肿、抗肿瘤等功效,其主要活性成分为高乌甲素和冉乌头碱,且氢溴酸高乌甲素为我国首创无成瘾性中枢性镇痛药物,有较高的药用价值及开发前景。因此,如何优化提取工艺,提高红花干燥花及高乌头干燥根中活性成分的提取率尤为重要。<br>  本研究选取不同品种的红花和高乌头为研究对象,采用不同的提取方法提取其有效成分,主要包括:①以总黄酮提取率作为参考指标,采用加热回流法提取红花干燥花中的总黄酮;②以蛋白质提取率为参考指标,采用加热辅助碱溶酸沉法和超声辅助碱溶酸沉法提取红花籽粕中蛋白质;③以高乌甲素和冉乌头碱的总提取率为参考指标,采用加热回流法和超声细胞破碎法提取高乌头干燥根中的高乌甲素及冉乌头碱。在各单因素实验结果的基础上辅以正交实验或响应面实验,结合高效液相色谱法、凯式定氮等技术,对两种药用植物的主要有效成分进行分析,确定上述各实验的最佳提取工艺,并为工业化生产提供理论依据。本论文主要研究结果如下:<br>  1.红花干燥花中总黄酮的提取工艺优化<br>  采用加热回流法,以乙醇作溶剂进行单因素实验,并以单因素实验结果为基础,以总黄酮提取率为参考指标,按L9(34)设计正交实验,研究如何能效提取红花干燥花中的总黄酮。研究结果表明:①红花干燥花中总黄酮提取率的影响因素依次为:提取温度>料液比>乙醇浓度>提取时间;②最佳提取工艺为:料液比(1∶25)、提取温度(85℃)、提取时间(2.5h)、乙醇浓度(75%)、提取次数(2次),提取率可达5.45%,高于颜辉、井文华及王超等人的报道,且方法简单,易于操作,适用于工业化生产。<br>  2.红花籽粕中蛋白质的提取工艺优化<br>  分别采用加热辅助碱溶酸沉法和超声辅助碱溶酸沉法进行单因素实验,以氢氧化钠水溶液为溶剂,以蛋白质提取率为参考指标,并将单因素实验结果与Box-Behnken中心组合实验相结合,筛选其最佳提取工艺。实验结果表明:(1)加热辅助碱溶酸沉法的红花籽粕蛋白质得率可达31.44%,具体参数条件为:①红花籽粕中蛋白质提取率的影响因素水平依次为:料液比>提取时间>pH值>提取温度;②最佳提取工艺为:料液比(1∶21.8)、pH值(10.24)、提取时间(50min)、提取温度(41.8℃),提取次数(2次);(2)超声辅助碱溶酸沉法蛋白质得率可达40.13%:①红花籽粕中蛋白质提取率的影响因素水平依次为:超声时间>超声功率>料液比>pH值;②最佳提取工艺为:料液比(1∶30.2)、pH值(9.09)、超声时间(80min)、超声功率(240W),提取次数(2次)。综上所述,超声辅助碱溶酸沉法蛋白质提取率高于加热辅助碱溶酸沉法且该提取率高于夏明及李保山等人的报道,工艺操作简便,成本低,适用于工业化生产。<br>  3.高乌头干燥根中高乌甲素和冉乌头碱的提取工艺优化<br>  分别采用超声细胞破碎法和加热回流法进行单因素实验,以一定比例的95%乙醇、乙酸乙酯及氨试剂为溶剂,以高乌甲素和冉乌头碱的总提取率为参考指标,并将单因素实验结果与Box-Behnken中心组合实验相结合,通过HPLC法进行定性定量检测,筛选其最佳提取工艺。实验结果表明:(1)超声细胞破碎法的高乌甲素及冉乌头碱总提取率可达0.82%,具体参数条件为:①高乌甲素及冉乌头碱总提取率的影响因素水平依次为:超声时间>超声功率>料液比;②最佳提取工艺为:料液比(1∶64.7)、提取时间(59.85min)、提取功率(250.5W)、提取次数(2次);(2)加热回流法中高乌甲素及冉乌头碱总提取率可达1.03%,具体参数条件为:①高乌甲素及冉乌头碱提取率的影响因素水平依次为:提取时间>料液比>提取温度;②最佳工艺为:料液比(1∶69.9)、提取温度(74.7℃)、提取时间(2.5h)时、提取次数(2次)。综上所述,加热回流法优于超声细胞破碎法。

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