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摘要生物传感器在生物医学分析、环境检测、食品安全及质量检测领域均有广泛的应用。通过原核表达得到两种细胞色素P450酶，分别作为分子识别元件，构建了两种细胞色素P450酶电化学生物传感器，建立了生物信号分子一氧化氮和脱落酸检测新方法，主要包括以下三个部分：<br>　　1.利用大肠杆菌原核表达莱茵衣藻细胞色素P45055B1（CYP55B1）并采用镍柱纯化。基于戊二醛的强交联能力，将细胞色素P45055B1固定于热裂解石墨电极表面。CYP55B1在电极表面具有电化学信号，在0.5V/s的扫速下其氧化还原峰电位分别为-0.35V和-0.38V。CYP55B1催化一氧化氮还原为一氧化二氮，还原峰电位为-0.85V。此峰电流用于一氧化氮的电化学检测，一氧化氮的检测线性范围为14.4～108μmol·L-1,检测限（LOD）为10.47μmol·L-1,线性回归方程为：y=0.01696x?0.0344（R2=0.9766）。该生物传感器对NO具有高度的专一性，能避免其他含氮类似物的干扰。<br>　　2.原核表达、镍柱纯化制备了拟南芥细胞色素P450707A3（CYP707A3）。双十六烷基磷酸（DHP）能形成双层类脂膜，将CYP707A3固定在热裂解石墨电极表面。CYP707A3实现了直接电化学，在0.5V/s的扫速下其氧化还原峰电位分别为-0.50V和-0.58V。在有氧条件下CYP707A3催化脱落酸（ABA)氧化，氧化峰电位为-0.50V。此峰电流用于ABA的电化学检测。该传感器对ABA的检测线性范围为0～200nmol·L-1，检测限（LOD）为4.85nmol·L-1，线性回归方程为：y=0.1041x-0.4860（R2=0.9757）。该传感器具有良好的特异性，对生长素、细胞分裂素等常见植物激素不具有响应。<br>　　3.采用荧光光谱法研究了ABA与CYP707A3的相互作用。研究表明：ABA通过一种静态猝灭的方式猝灭CYP707A3的铁卟啉基团的荧光信号。依据ABA和CYP707A3相互作用的结合常数在25℃为6.26×104L·mol-1以及结合位点数为1，计算结合反应的热力学常数，推断出二者的结合作用力主要为范德华力或氢键。ABA与CYP707A3活性中心铁卟啉的结合，导致CYP707A3内源的色氨酸和酪氨酸残基的荧光发生动态猝灭，并引起CYP707A3的构象变化。同步荧光光谱分析结果表明ABA与CYP707A3的相互作用位点接近于色氨酸，引起色氨酸残基周围的极性导致增强。