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摘要非酒精性脂肪肝病（NAFLD）是一种常见的慢性肝病，全世界患病人数占比约为25%，根据是否有特异性炎症分为非酒精性脂肪肝（NAFL）和非酒精性脂肪性肝炎（NASH），若不采取有效措施，NAFL将演化进展为NASH。NASH作为一个日益严重、也越来越引起人们关注的健康问题，其患病率约为2-5%，主要特点是脂肪堆积、胰岛素抵抗、严重炎症和肝纤维化。NASH患者发生肝硬化、肝细胞癌（HCC）和肝功能衰竭的风险增加而且有潜在的致命可能性。NASH作为一种多因素疾病，发病机制复杂，影响因素众多，虽然已经进行了大量、广泛的临床和基础研究，但目前还没有能够有效治疗NASH的药物。因此，研究NASH发生发展中的机制和病理过程，开发治疗NASH的关键靶点和富有成效的策略具有重要意义。<br>　　心磷脂（CL）——一种线粒体特异性磷脂，是维持线粒体结构和功能所必需的。心磷脂合酶1（CRLS1）催化CL线粒体从头合成的最后一步。CRLS1属于CDP醇磷酸转移酶Ⅰ类家族，位于线粒体中，在肝脏中高表达，参与细胞凋亡和肝癌的发生。最近，ElahuG等人报道称棕色和米色脂肪中CL缺失抑制葡萄糖摄取，脂肪中CRLS1表达水平与胰岛素敏感性呈正相关。因此，脂肪CL是机体代谢适应和葡萄糖稳态的关键控制点。考虑到胰岛素敏感性与NASH进展密切相关，我们假设CRLS1可能在肝脂肪变性进展过程中起重要作用。然而CRLS1是否参与NASH的病理进程及其相关分子机制尚不清楚。考虑到肝细胞占肝脏细胞总数的60%，是肝功能的主体单位，并且在肝脂肪变性的过程中起着核心作用，本课题主要研究CRLS1在肝细胞中的作用及相关机制。<br>　　我们首先检测了高脂高胆固醇（HFHC）饮食诱导的NASH模型下野生型小鼠肝脏中CRLS1的蛋白含量，发现相较于普通饲料喂养的对照组小鼠，CRLS1表达显著下降，而后在PA刺激的L-02肝细胞中也观察到了这一现象。基于这一结果，我们推测CRLS1可能在肝细胞中对NASH病理进程发挥一定作用。通过对CRLS1过表达L-02细胞的研究发现，CRLS1能够改善脂质蓄积和炎症，反之，CRLS1缺少加重这些症状。在体外实验结果的基础上，我们对CRLS1肝细胞特异性缺失（CRLS1-HKO）小鼠及其对照小鼠进行了16周的HFHC饮食饲养，并检测发现CRLS1-HKO小鼠的体重、血糖和肝重相较于Flox对照组小鼠都显著升高，除此之外，和血液中甘油三酯（TG）和总胆固醇（TC）的含量也都明显增加。通过病理切片染色、Westernblot和qRT-PCR等研究观察到CRLS1缺失小鼠中肝细胞脂滴沉积加重、脂代谢紊乱、炎症反应和纤维化程度也明显恶化。<br>　　在探明CRLS1在NASH病理进程中的作用后我们进一步采取了RNA测序的方法，通过数字基因表达谱技术筛选出了HFHC饮食诱导的NASH条件下十个可能与CRLS1有关的基因。而后检测了这十个基因在正常饲料和HFHC饲料喂养16周的野生型小鼠中的表达，结合文献推测活化转录因子3（ATF3）可能参与CRLS1对NASH的调控作用。深入研究发现CRLS1抑制ATF3的表达，而ATF3的过表达一定程度上逆转了CRLS1过表达对脂质代谢紊乱和炎症反应的改善作用，明确了ATF3参与CRLS1在NASH发生发展中的作用。<br>　　NASH目前在世界范围内的患病率逐年上升，是肝功能不全的主要原因之一。先前的研究表明脂肪CRLS1水平与胰岛素敏感性有关，但CRLS1在NASH病理过程中的确切作用及其相关机制尚未阐明。在此，我们发现CRLS1的蛋白表达水平在HFHC饮食诱导的小鼠模型中显著减少。体外研究表明，CRLS1的过度表达明显减轻了棕榈酸诱导的肝细胞脂肪变性和炎症反应，而shRNA介导的CRLS1基因敲低加重了这些异常。此外，在CRLS1-HKO小鼠中，HFHC饮食诱导的肝脂肪变性、炎症反应和纤维化在NASH发展过程中明显加重。通过转录组学分析证实ATF3是CRLS1肝细胞敲除后的关键差异表达基因，进一步研究表明，CRLS1抑制了棕榈酸刺激肝细胞ATF3的表达，而ATF3部分逆转代谢应激下CRLS1过表达抑制的脂质积聚和炎症。综上所述，CRLS1通过抑制ATF3的表达改善NASH病理过程中的肝脂肪变性、炎症和纤维化。